Illumina GAiix 能夠?qū)悠分械娜縎mall RNA 進行深度測序,達到定性定量的研究目的。
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SmallRNA 是生命活動重要的調(diào)控因子,在基因表達調(diào)控、生物個體發(fā)育、代謝及疾病的發(fā)生等生理過程中起著重要的作用。Illumina GAiix 能夠?qū)悠分械娜縎mall RNA 進行深度測序,達到定性定量的研究目的。每個樣品可得到3 Million 以上的Small RNA 測序序列。通過大量的平行測序,可以發(fā)掘、鑒定并定量出任何物種全基因組水平的小RNA 圖譜、新miRNA 分子的挖掘、靶基因的預(yù)測和鑒定和樣品間差異表達分析等科學(xué)應(yīng)用。
小RNA測序?qū)嶒灹鞒蹋?/strong>樣品檢測--樣品制備--cluster制備--上機--基本數(shù)據(jù)處理--生物信息分析
小RNA測序生物信息分析:
1) 數(shù)據(jù)產(chǎn)出統(tǒng)計
2) 去除低質(zhì)量、污染及接頭后的序列長度分布統(tǒng)計;
3) 不同樣本間的序列情況統(tǒng)計;
4) 與參考序列比對情況統(tǒng)計(需甲方提供參考序列信息);
5) 與已發(fā)布miRNA數(shù)據(jù)庫的比對統(tǒng)計;
6) 與已發(fā)布rRNA數(shù)據(jù)庫的比對統(tǒng)計;
7) 重復(fù)序列注釋統(tǒng)計;
8) 與mRNA、exon、intron的相關(guān)度統(tǒng)計;
9) 小RNA注釋統(tǒng)計;
10) 新的miRNA預(yù)測;
11) 不同樣本間的差異統(tǒng)計分析;
12) 靶基因預(yù)測;
小RNA測序樣品要求:
1.請自由選擇樣品RNA的提取方法,如Trizol法、商業(yè)化試劑盒等(用于小RNA測序的總RNA建議使用專業(yè)的抽提試劑盒或trizol抽提沉淀法),但請勿使用LiCl沉淀,同時滿足樣品質(zhì)量和總量要求。
2.請在樣品提供電泳膠圖或Aglient Bioanalyzer中一種或兩種形式的樣品分析結(jié)果。
3.樣品質(zhì)量要求:經(jīng)過DNA酶處理(小RNA測序樣品不需要DNA酶處理),OD260/280為1.8-2.2,完整性良好,如使用Agilent Bioanalyzer儀器檢測,則獲得的總RNA應(yīng) 28S:18S≥1,RIN≥8。
4.針對不同的應(yīng)用,樣品濃度及總量要求如下:
a)DGE測序樣品:濃度≥200 ng/μl、總量≥10μg(動物樣品總量≥8μg);
b)轉(zhuǎn)錄組樣品:濃度≥600ng/μl、總量≥20 μg;
c)Small RNA測序樣品:濃度≥400ng/μl、總量≥30μg。
d)建議在條件允許情況下,提供可供兩次樣品制備的量,以確保實驗質(zhì)量及延續(xù)性
5.樣品保存條件:選擇Trizol、DEPC水一種,請在樣品信息單中注明。
6.樣品運輸:樣品請置于1.5 ml管中,使用封口膜封好。使用足量的干冰運輸,并選用較快的運輸方式,以降低運輸過程中樣品降解的可能性。
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