酵母表達(dá)純化服務(wù)-真核蛋白表達(dá)

　　酵母表達(dá)系統(tǒng)具有原核和高等真核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)，是真核表達(dá)蛋白的常用系統(tǒng)之一，其中畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)是常用的、有效的表達(dá)系統(tǒng)之一，它具有以下優(yōu)勢(shì)：①擁有目前更強(qiáng)，調(diào)控機(jī)理嚴(yán)格的啟動(dòng)子之一醇氧化酶基因AOX1啟動(dòng)子，非常利于外源基因的表達(dá)調(diào)控；②具有翻譯后的蛋白加工修飾功能例如磷酸化、糖基化等等，高度還原目的蛋白；③表達(dá)的目的蛋白的可溶性高；④外源基因可以單拷貝或者多拷貝的形式在特定的位點(diǎn)整合進(jìn)酵母染色體上，伴隨著染色體的復(fù)制而復(fù)制，有較高的遺傳穩(wěn)定性；⑤既可以在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，也可在細(xì)胞外表達(dá)。
 

　　1、密碼子優(yōu)化：確�；�因轉(zhuǎn)錄、mRNA翻譯以及翻譯后修飾的正常進(jìn)行；
　　2、載體構(gòu)建并轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株：目的基因克隆或目的基因合成；限制性?xún)?nèi)切酶酶切骨架載體并純化；目的基因插入骨架載體；載體線(xiàn)性化處理；轉(zhuǎn)化酵母表達(dá)菌株：
　　3、高表達(dá)酵母菌株鑒定篩選：PCR篩選陽(yáng)性克隆并測(cè)序鑒定，SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)不同菌株的表達(dá)情況，挑選適合用于目的蛋白表達(dá)的酵母表達(dá)株系；
　　4、蛋白表達(dá)分析鑒定：將挑選的酵母表達(dá)株系進(jìn)行小量表達(dá)檢測(cè)；
　　5、蛋白表達(dá)條件優(yōu)化：根據(jù)小量表達(dá)檢測(cè)結(jié)果，優(yōu)化培養(yǎng)基以及誘導(dǎo)條件（菌的濃度，誘導(dǎo)劑的濃度，誘導(dǎo)時(shí)間等等），提高目的蛋白的表達(dá)量；
　　6、放大培養(yǎng)和純化：選擇更佳的誘導(dǎo)表達(dá)條件放大目的蛋白表達(dá)菌株的培養(yǎng)并純化目的蛋白；
　　7、目的蛋白檢測(cè)及濃度測(cè)定：Western Blot檢測(cè)目的蛋白；測(cè)定蛋白濃度。

　　兩種表達(dá)類(lèi)型可供選擇：胞內(nèi)蛋白表達(dá)和分泌蛋白表達(dá)；
　　目的蛋白還原度高：具有翻譯后的蛋白加工修飾功能；
　　多種載體以及表達(dá)菌株可供選擇；
　　團(tuán)隊(duì)經(jīng)驗(yàn)豐富。