雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn) BiFC
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BiFC是一種直觀、快速地判斷目標(biāo)蛋白在活細(xì)胞中的相互作用和定位的技術(shù)。將熒光蛋白分成兩個(gè)不具有熒光活性的分子片段(N-fragment、C-fragment),然后N-fragment和C-fragment分別融合兩個(gè)目標(biāo)蛋白A、B,如果A與B蛋白發(fā)生互作,則N-fragment和C-fragment在空間上靠近,就會(huì)形成完整的具有活性的熒光蛋白分子,在激發(fā)光的激發(fā)下,熒光蛋白發(fā)出熒光。若A與B蛋白無(wú)互作,則不能被激發(fā)岀熒光。
實(shí)驗(yàn)流程 、贅(gòu)建表達(dá)載體:目的基因克隆或目的基因合成;限制性內(nèi)切酶酶切骨架載體并純化;目的基因插入骨架載體;轉(zhuǎn)化大腸桿菌,篩選陽(yáng)性克隆并測(cè)序鑒定;;
②轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌:將目的載體轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌菌株內(nèi),例如:GV3101;
、刍熳煵荩簩⒑蠳-fragment與C-fragment的農(nóng)桿菌菌液按照比例混勻,共同注射本氏煙葉片;
④激光共聚焦觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果并拍照記錄。
技術(shù)服務(wù)范疇:驗(yàn)證兩個(gè)已知蛋白質(zhì)間的相互作用
技術(shù)服務(wù)優(yōu)勢(shì):
①團(tuán)隊(duì)經(jīng)驗(yàn)豐富;
②提供原始圖片,保證數(shù)據(jù)真實(shí)可靠;
③該技術(shù)得到的蛋白互作關(guān)系符合體內(nèi)實(shí)際情況,結(jié)果可信度高。