凝膠阻滯實(shí)驗(yàn) EMSA
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凝膠阻滯(Electrophoretic mobility shift assay, EMSA)實(shí)驗(yàn)是體外分析DNA與蛋白質(zhì)相互作用的一種特殊的凝膠電泳技術(shù)。其原理為蛋白質(zhì)與核酸分子結(jié)合后將大大增加其相對(duì)分子質(zhì)量,而凝膠電泳中核酸的遷移率與其相對(duì)分子質(zhì)量成正比,因此沒(méi)有結(jié)合蛋白質(zhì)的核酸片段跑得快,而與蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物的核酸則跑得慢。
實(shí)驗(yàn)流程
凝膠阻滯(Electrophoretic mobility shift assay, EMSA)實(shí)驗(yàn)是體外分析DNA與蛋白質(zhì)相互作用的一種特殊的凝膠電泳技術(shù)。其原理為蛋白質(zhì)與核酸分子結(jié)合后將大大增加其相對(duì)分子質(zhì)量,而凝膠電泳中核酸的遷移率與其相對(duì)分子質(zhì)量成正比,因此沒(méi)有結(jié)合蛋白質(zhì)的核酸片段跑得快,而與蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物的核酸則跑得慢。
、贅(gòu)建表達(dá)載體:目的基因克隆或目的基因合成;限制性?xún)?nèi)切酶酶切骨架載體并純化;目的基因插入骨架載體;轉(zhuǎn)化大腸桿菌,篩選陽(yáng)性克隆并測(cè)序鑒定;
、谵D(zhuǎn)化表達(dá)菌株:將目的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株;
③制備目的蛋白:誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá)并提取純化目的蛋白;
④進(jìn)行凝膠阻滯(EMSA)實(shí)驗(yàn);
、菖恼沼涗泴(shí)驗(yàn)結(jié)果。
1、轉(zhuǎn)錄因子與啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合驗(yàn)證
2、蛋白-核酸復(fù)合體的形成
技術(shù)服務(wù)優(yōu)勢(shì):
、賵F(tuán)隊(duì)經(jīng)驗(yàn)豐富;
、谔峁┰紙D片,保證數(shù)據(jù)真實(shí)可靠。