AbMole Calcein-AM/PI雙染試劑盒的檢測原理及優(yōu)勢
細(xì)胞生物學(xué)研究中，細(xì)胞活性檢測是基礎(chǔ)且關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)。然而，傳統(tǒng)方法在檢測活細(xì)胞和死細(xì)胞時(shí)常常面臨諸多挑戰(zhàn)：例如，檢測過程復(fù)雜、耗時(shí)，容易受到細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)條件的限制；熒光信號不穩(wěn)定，難以準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞；或者需要昂貴的設(shè)備支持，增加了實(shí)驗(yàn)成本。這些問題不僅影響實(shí)驗(yàn)效率，還可能導(dǎo)致結(jié)果偏差，給科研人員帶來諸多困擾。AbMole的Calcein-AM/PI活死細(xì)胞雙染試劑盒（AbMole，M55257），專為解決這些痛點(diǎn)而設(shè)計(jì)，它的檢測原理基于兩種熒光染料：Calcein-AM和碘化丙啶（PI），能夠快速、準(zhǔn)確地區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞，為細(xì)胞活性檢測提供了一種高效、便捷且可靠的解決方案。AbMole為全球科研客戶提供高純度、高生物活性的抑制劑、細(xì)胞因子、人源單抗、天然產(chǎn)物、熒光染料、多肽、靶點(diǎn)蛋白、化合物庫、抗生素等科研試劑，全球大量文獻(xiàn)專利引用。
檢測原理
Calcein-AM/PI活死細(xì)胞雙染試劑盒（AbMole，M55257）內(nèi)含有Calcein-AM和Propidium Iodide（PI，碘化丙啶），Calcein AM 是在傳統(tǒng)的鈣黃綠素（Calcein）上添加了乙酰甲氧基甲酯即（AM）基團(tuán)，導(dǎo)致其具有較強(qiáng)的疏水性，因此容易穿過細(xì)胞膜進(jìn)入胞內(nèi)。Calcein AM本身無熒光，在進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞中內(nèi)源性酯酶水解，生成具有強(qiáng)負(fù)電荷且不能通過細(xì)胞膜的極性分子Calcein并滯留在細(xì)胞內(nèi)，而Calcein可發(fā)出強(qiáng)綠色熒光（Ex/Em= 494nm/517nm）[1]。由于死細(xì)胞缺乏上酯酶，不能或很少能產(chǎn)生Calcein，因此僅活細(xì)胞會(huì)被染色為強(qiáng)綠色熒光，死細(xì)胞不能被染色。PI則是一種無法透過活細(xì)胞膜的染料，由于死細(xì)胞的細(xì)胞膜選擇透過性喪失，PI可以進(jìn)入胞內(nèi)與雙鏈DNA特異性結(jié)合產(chǎn)生強(qiáng)烈的紅色熒光（Ex/Em=535nm/617nm），從而對死細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記[2]。因此，上述兩種染料的聯(lián)合使用，可以對活細(xì)胞與死細(xì)胞同時(shí)進(jìn)行雙重?zé)晒馊旧�，用于�?shí)驗(yàn)中細(xì)胞活性或細(xì)胞毒性的檢測。用490nm激發(fā)時(shí)可用熒光顯微鏡同時(shí)觀察活細(xì)胞和死細(xì)胞；而用545nm激發(fā)時(shí)僅可觀察到死細(xì)胞。2014年，AbMole的兩款抑制劑分別被西班牙國家心血管研究中心和美國哥倫比亞大學(xué)用于動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，相關(guān)科研成果發(fā)表于頂刊 Nature 和 Nature Medicine。
圖1. 活死細(xì)胞染色試劑盒的檢測原理
優(yōu)勢
AbMole的Calcein-AM/PI活死細(xì)胞雙染試劑盒（AbMole，M55257）具有多種優(yōu)勢，主要包括以下幾點(diǎn)：
- 1.快速檢測：操作簡單，染色過程僅需40分鐘左右，無需復(fù)雜的前處理步驟，大大節(jié)省了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
- 2.高靈敏度：Calcein-AM和PI的熒光信號清晰明亮，能夠準(zhǔn)確區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞，即使在細(xì)胞密度較低的情況下也能獲得可靠的檢測結(jié)果。
- 3.廣泛適用性：適用于多種細(xì)胞類型，包括貼壁細(xì)胞、消化后的懸浮細(xì)胞以及原代細(xì)胞，不受細(xì)胞種類限制。對設(shè)備要求較低，普通熒光顯微鏡或者使用酶標(biāo)儀即可完成檢測，降低了實(shí)驗(yàn)成本。
- 4.穩(wěn)定可靠：試劑穩(wěn)定性高，熒光信號持久，不易淬滅，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有重復(fù)性和可靠性。
范例詳解
研究者們開發(fā)了一種無載體的“特洛伊木馬”直徑可變金屬-有機(jī)納米診療劑，通過配位驅(qū)動(dòng)的超分子順序共組裝抗腫瘤抑制劑PEM、過渡金屬離子（FeIII）和血管生成抑制劑假辣木酸B（PAB）。該納米制劑可有效抑制腫瘤血管的生成。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，科研人員使用了由AbMole提供的Calcein-AM/PI活死細(xì)胞雙染試劑盒（AbMole，M55257）檢測HeLa、HTdMEC 和 HUVEC 細(xì)胞的細(xì)胞活力[3]。
圖2. Fluorescence images of live/dead staining assay of HeLa and HTdMEC cells cultured with different formulations[3].
參考文獻(xiàn)及鳴謝
[1] HOLLó Z, HOMOLYA L, DAVIS C W, et al. Calcein accumulation as a fluorometric functional assay of the multidrug transporter [J]. Biochimica et biophysica acta, 1994, 1191(2): 384-8.
[2] NICOLETTI I, MIGLIORATI G, PAGLIACCI M C, et al. A rapid and simple method for measuring thymocyte apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry [J]. Journal of immunological methods, 1991, 139(2): 271-9.
[3] FAN Z, SHI D, ZUO W, et al. Trojan-Horse Diameter-Reducible Nanotheranostics for Macroscopic/Microscopic Imaging-Monitored Chemo-Antiangiogenic Therapy [J]. ACS applied materials & interfaces, 2022, 14(4): 5033-52.
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