多肽合成

具體合成由下列幾個(gè)循環(huán)組成：
　一、去保護(hù)：Fmoc保護(hù)的柱子和單體必須用一種堿性溶劑（piperidine）去 除氨基的保護(hù)基團(tuán)。
　　　二、激活和交聯(lián)：下一個(gè)氨基酸的羧基被一種活化劑所活化�；罨�的單體與游離的氨基反應(yīng)交聯(lián)，形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅(qū)使反應(yīng)完成。循環(huán)：這兩步反應(yīng)反復(fù)循環(huán)直到合成完成。
　三、洗脫和脫保護(hù)：多肽從柱上洗脫下來，其保護(hù)基團(tuán)被一種脫保護(hù)劑（TFA） 洗脫和脫保護(hù)。
3. 樹脂的選擇及氨基酸的固定
將固相合成與其他技術(shù)分開來的最主要的特征是固相載體，能用于多肽合成的固相載體必須滿足如下要求：必須包含反應(yīng)位點(diǎn)（或反應(yīng)基團(tuán)），以使肽鏈連在這些位點(diǎn)上，并在以后除去；必須對(duì)合成過程中的物理和化學(xué)條件穩(wěn)定；載體必須允許在不斷增長的肽鏈和試劑之間快速的、不受阻礙的接觸；另外，載體必須允許提供足夠的連接點(diǎn)，以使每單位體積的載體給出有用產(chǎn)量的肽，并且必須盡量減少被載體束縛的肽鏈之間的相互作用。用于固相法合成多肽的高分子載體主要有三類：聚苯乙烯-苯二乙烯交聯(lián)樹脂、聚
丙烯酰胺、聚乙烯-乙二醇類樹脂及衍生物，這些樹脂只有導(dǎo)入反應(yīng)基團(tuán)，才能直接連上（第一個(gè)）氨基酸。根據(jù)所導(dǎo)入反應(yīng)基團(tuán)的不同，又把這些樹脂及樹脂衍生物分為氯甲基樹脂、羧基樹脂、氨基樹脂或酰肼型樹脂。BOC合成法通常選擇氯甲基樹脂，如Merrifield樹脂；FMOC合成法通常選擇羧基樹脂如王氏樹脂。氨基酸的固定主要是通過保護(hù)氨基酸的羧基同樹脂的反應(yīng)基團(tuán)之間形成的共價(jià)鍵來實(shí)現(xiàn)的，形成共價(jià)鍵的方法有多種：氯甲基樹脂，通常先制得保護(hù)氨基酸的四甲銨鹽或鈉鹽、鉀鹽、銫鹽，然后在適當(dāng)溫度下，直接同樹脂反應(yīng)或在合適的有機(jī)溶劑如二氧六環(huán)、DMF或DMSO中反應(yīng)；羧基樹脂，則通常加入適當(dāng)?shù)目s合劑如DCC或羧基二咪唑，使被保護(hù)氨基酸與樹脂形成共酯以完成氨基酸的固定；氨基樹脂或酰肼型樹脂，卻是加入適當(dāng)?shù)目s合劑如DCC后，通過保護(hù)氨基酸與樹脂之間形成的酰胺鍵來完成氨基酸的固定。
4. 氨基、羧基、側(cè)鏈的保護(hù)及脫除
　　要成功合成具有特定的氨基酸順序的多肽，需要對(duì)暫不參與形成酰胺鍵的氨基和羧基加以保護(hù)，同時(shí)對(duì)氨基酸側(cè)鏈上的活性基因也要保護(hù)，反應(yīng)完成后再將保護(hù)基因除去。同液相合成一樣，固相合成中多采用烷氧羰基類型作為α氨基的保護(hù)基，因?yàn)檫@樣不易發(fā)生消旋。最早是用芐氧羰基，由于它需要較強(qiáng)的酸解條件才能脫除，所以后來改為叔丁氧羰基（BOC）保護(hù)，用TFA（三氟乙酸）脫保護(hù)，但不適用含有色氨酸等對(duì)酸不穩(wěn)定的肽類的合成。1978年，chang Meienlofer和Atherton等人采用Carpino報(bào)道的Fmoc(9-芴甲氧羰基)作為α氨基保護(hù)基，F(xiàn)moc基對(duì)酸很穩(wěn)定，但能用哌啶-CH2CL2或哌啶-DMF脫去，近年來，F(xiàn)moc合成法得到了廣泛的應(yīng)用。羧基通常用形成酯基的方法進(jìn)行保護(hù)。甲酯和乙酯是逐步合成中保護(hù)羧基的常用方法，可通過皂化除去或轉(zhuǎn)變?yōu)殡乱员阌糜谄瑪嘟M合；叔丁酯在酸性條件下除去；芐酯常用催化氫化除去。對(duì)于合成含有半胱氨酸、組氨酸、精氨酸等帶側(cè)鏈功能基的氨基酸的肽來說，為了避免由于側(cè)鏈功能團(tuán)所帶來的副反應(yīng)，一般也需要用適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基將側(cè)鏈基團(tuán)暫時(shí)保護(hù)起來。保護(hù)基的選擇既要保證側(cè)鏈基團(tuán)不參與形成酰胺的反應(yīng)，又要保證在肽合成過程中不受破壞，同時(shí)又要保證在最后肽鏈裂解時(shí)能被除去。如用三苯甲基保護(hù)半胱氨酸的S-，用酸或銀鹽、汞鹽除去；組氨酸的咪唑環(huán)用2,2,2-三氟-1-芐氧羰基和2,2,2-三氟-1-叔丁氧羰基乙基保護(hù)，可通過催化氫化或冷的三氟乙酸脫去。精氨酸用金剛烷氧羰基（Adoc）保護(hù)，用冷的三氟乙酸脫去。
　　固相中的接肽反應(yīng)原理與液相中的基本一致，將兩個(gè)相應(yīng)的氨基被保護(hù)的及羧基被保護(hù)的氨基酸放在溶液內(nèi)并不形成肽鍵，要形成酰胺鍵，經(jīng)常用的手段是將羧基活化，變成混合酸酐、活潑酯、酰氯或用強(qiáng)的失去劑（如碳二亞氨）形成對(duì)稱酸酐等方法來形成酰胺鍵。其中選用DCC、HOBT或HOBT/DCC的對(duì)稱酸酐法、活化酯法接肽應(yīng)用最廣。
裂解及合成肽鏈的純化 BOC法用TFA+HF裂解和脫側(cè)鏈保護(hù)基，F(xiàn)MOC法直接用TFA，有時(shí)根據(jù)條件不同，其它堿、光解、氟離子和氫解等脫保護(hù)方法也被采用。合成肽鏈進(jìn)一步的精制、分離與純化通常采用高效液相色譜、親和層析、毛細(xì)管電泳等。
5. HPLC分析和純化
　　分析HPLC使用柱子和泵系統(tǒng)，可以經(jīng)受傳遞高壓，這樣可以用極細(xì)的微粒（3-10μ m）做填料。由此多肽要在幾分鐘內(nèi)高度被分析。
　　HPLC分兩類：離子交換和反相。 離子交換HPLC依靠多肽和固相間的直接電荷相互作用。柱子在一定PH范圍帶有特定電荷衍變成一種離子體，而多肽或多肽混合物，由其氨基酸組成表現(xiàn)出相反電荷。 分離是一種電荷相互作用，通過可變PH， 離子強(qiáng)度， 或兩者洗脫出多肽，通常， 先用低離子強(qiáng)度的溶液，以后逐漸加強(qiáng)或一步一步加強(qiáng)，直到多肽火柱中洗脫出。離子交換分離的一個(gè)例子使用強(qiáng)陽離子交換柱。如sulfoethylaspartimide通過酸性PH中帶正電來分離。
　　反相HPLC條件與正常層析正相反。多肽通過疏水作用連到柱上，用降低離子強(qiáng)度洗脫， 如增加洗脫劑的疏水性。通常柱子由共價(jià)吸附到硅上的碳?xì)渫殒湗?gòu)成，這種鏈長度為G4-G8碳原子。 由于洗脫是一種疏水作用。大的疏水肽用短鏈柱洗脫好。 然而，總體實(shí)踐中， 這兩類柱互變無多少顯著差別，別類載體由碳水化合物構(gòu)成， 比如苯基。
　　典型的操作常由兩綬沖劑組成，0.1%TFA-H2o和80% acetonitrile 0.1%TFA--H2o稀acetonitrile。用線型梯變以每分鐘0.5%到1.0%改變的速度混合。常見分析和純化用柱為4.6×250mm(3-10μ m)和22×250mm(10μ m). 如果用徑向填柱，那么大小是8×100（3-10μ m）和25×250mm(10μ m)
　　大量各種緩沖劑含許多不同試劑，比如heptafluorobutyric酸，0.1%磷酸， 稀He formic酸(5-6%, pH2-4), 10-100mM NH4HCO3, 醋酸鈉/氨，TFA/TEA，磷酸鈉或鉀，異戊酚。這樣許多不同組合可形成緩沖劑，但要注意一點(diǎn)：硅反相柱料不能長時(shí)間暴露于高pH，甚至微堿pH， 因?yàn)檫@樣會(huì)破壞柱子。

6. 網(wǎng)上參考價(jià)格
優(yōu)惠價(jià)格提供。

7. 嚴(yán)守秘密：對(duì)于客戶提供的多肽序列，我們有為客戶保密的義務(wù)和職責(zé)，嚴(yán)格保守技術(shù)機(jī)密。尊重客戶的知識(shí)產(chǎn)權(quán)。
8. 服務(wù)范圍：
• 線性肽、環(huán)肽，修飾肽
• 不同長度（含2-50個(gè)殘基）
• 不同量級(jí)（毫克級(jí)到克級(jí)、公斤級(jí)）
• 不同純度范圍（脫鹽、>70%、>80%、>90%、>95%、>98%）
• 不同修飾（熒光/染料標(biāo)記、蛋白載體耦聯(lián)、酰化等）
檢測(cè)報(bào)告：
• 質(zhì)譜圖
• 高效液相色譜分析圖
• 水分含量測(cè)定
• 離子測(cè)定
• 紫外
• 紅外
• 核磁
• 元素分析
• 氨基酸分析
前面兩項(xiàng)為我公司免費(fèi)提供，后面幾項(xiàng)，如客戶有要求，需額外付費(fèi)　　
9. 多肽修飾服務(wù)
修飾 價(jià)格
N端-乙�；�(Acetylation) 150元
甲�；�(Formylation) 1600元
C-端酰胺化(Amidation,C-termainal) 300元
磷酸化(Phosphorylation-Tyrosine) 1800元
磷酸化(Phosphorylation-Serine) 1800元
磷酸化(Phosphorylation-Threonine) 1800元
生物素修飾(Biotin) 500元
環(huán)化修飾(N-端和C-端首尾成環(huán)、Lys和Asp或Glu環(huán)化、其它環(huán)化修飾) 800元
肉豆蔻酸（Myristoyl） 500元
香豆素修飾 1700元
pGlu焦谷氨酸修飾 200元
丹磺酰氯（dansyl chloride） 900元
DNP修飾 1000元
苯異硫氰酸酯（phenylisothiocyanate, PITC） 1000元
FITC(異硫氰酸)熒光修飾 1200元
FAM熒光修飾 1200元
蛋白載體偶聯(lián) 　
KLH(Keyholelimpetlleiiiocyanin) 1500元
BSA(Bovine serum albunin) 1100元
OVA(ovalbumin) 1300元
復(fù)合抗原肽(MAPs) 　
4 支鏈 MAPs 1000元
8 支鏈 MAPs 1000元
其它修飾 請(qǐng)來電詢價(jià)

10. 產(chǎn)品質(zhì)量： 本公司采用國際先進(jìn)的多肽人工合成技術(shù)，生產(chǎn)的多肽產(chǎn)品在質(zhì)量和產(chǎn)量上優(yōu)于現(xiàn)有的多肽固相合成儀，具有制備量大、合成步驟質(zhì)量可控、產(chǎn)品純度高、相對(duì)成本低的特點(diǎn)，尤其在長鏈多肽合成中優(yōu)勢(shì)顯著。


11. 交貨：時(shí)間為一般為2-3周，國際業(yè)務(wù)雖加上運(yùn)輸時(shí)間。我們?yōu)榭蛻裘赓M(fèi)提供多肽產(chǎn)品的質(zhì)譜圖，純度分析的HPLC色譜圖。
12. 運(yùn)輸
我們的運(yùn)輸采用聯(lián)邦快遞或EMS，運(yùn)輸費(fèi)用由我公司承擔(dān)，因運(yùn)輸原因?qū)е庐a(chǎn)品數(shù)量短缺或其他問題，由我公司重新合成作為賠償損失。