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基因敲除小鼠是指通過基因工程的方法使小鼠體內(nèi)某種或全部基因功能缺失的小鼠模型
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完全性基因敲除（Knockout，KO）小鼠，也叫全身性基因敲除小鼠，是通過基因敲除技術(shù)，把需要敲除目的基因的所有外顯子或幾個重要的外顯子或者功能區(qū)域敲除掉，獲得全身所有的組織和細(xì)胞中都不表達(dá)該基因的小鼠模型。
TurboKnockout®完全性基因敲除小鼠
TurboKnockout®完全性基因敲除小鼠是通過TurboKnockout®技術(shù)把需要敲除目的基因的所有外顯子或幾個重要的外顯子或功能區(qū)域敲除掉，使得全身所有的組織和細(xì)胞中都不表達(dá)該基因。建立在傳統(tǒng)基因打靶技術(shù)之上的TurboKnockout®基因編輯技術(shù)不僅具有傳統(tǒng)ES打靶技術(shù)成熟、修飾準(zhǔn)確、效果穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，更是使得傳統(tǒng)ES打靶技術(shù)減少兩代繁育時間，周期快至4個月，是大片段基因修飾等復(fù)雜模型的常用構(gòu)建方式。
TurboKnockout®完全性基因敲除小鼠的建系原則與流程：
1. 去除抗性基因Neo：選擇陽性TurboKnockout®小鼠與野⽣型小鼠雜交，自刪除Neo，獲得去除打靶載體中的Neo基因的F1代雜合子KO（+/-）小鼠。
2. 再挑選⼀對F1代雜合子KO小鼠（+/-）進(jìn)行自交，通過PCR鑒定篩選得到基因敲除的F2純合子KO小鼠（-/-）。
CRISPR-Pro完全性基因敲除小鼠
CRISPR-Pro完全性基因敲除小鼠主要采用靶基因設(shè)計和構(gòu)建gRNA與Cas表達(dá)質(zhì)粒，造成目的基因的功能區(qū)域被敲除，獲得全身所有的組織和細(xì)胞中都不表達(dá)該基因的小鼠模型。CRISPR-Pro技術(shù)沿用核酸酶介導(dǎo)的基因修飾技術(shù)體系，采用獨(dú)特的受精卵處理方式使受精卵偏好同源重組修復(fù)路徑，進(jìn)而提高同源重組效率，制作周期快至3個月。
CRISPR-Pro完全性基因敲除小鼠的建系原則與流程：
1. 通過針對一個或多個靶基因或靶基因不同位點(diǎn)設(shè)計、構(gòu)建相應(yīng)的gRNA質(zhì)粒，體外轉(zhuǎn)錄為RNA后，與Cas蛋白和mRNA⼀起原核顯微注射獲得測序鑒定陽性的F0代陽性小鼠。
2. F0代陽性小鼠與野⽣型小鼠進(jìn)行交配，獲得PCR和測序鑒定陽性的F1代雜合子小鼠。
3. 選擇來自同⼀只F0代小鼠，基因型⼀致的F1代雜合小鼠，達(dá)到性成熟后互配，可獲得F2代小鼠。對獲得的F2代小鼠進(jìn)行PCR及測序鑒定，理論上，F(xiàn)2代小鼠中25%為純合子，50%為雜合子，25%為野生小鼠。
手機(jī)版：基因敲除小鼠
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