常規(guī)基因敲除小鼠模型建立

建立常規(guī)基因敲除（knockout，簡稱KO）小鼠模型，使您感興趣的靶基因功能在小鼠所有細胞以及整個生命過程中永久缺失。

通過CRISPR基因編輯技術，構建一個常規(guī)基因敲除小鼠模型一般需要4-6個月。

根據基因序列設計合成sgRNA與Cas9 mRNA共同注射到小鼠受精卵，Cas9核酸酶、 sgRNA、基因組靶序列結合并切割雙鏈DNA ，通過非同源性末端接合(NHEJ)修復途徑造成靶基因的移碼突變或片段敲除，從而實現基因敲除。NHEJ修復是隨機的，可能在同一小鼠體內不同細胞造成的修復結果不同，F0小鼠需要繁殖一代，獲得穩(wěn)定遺傳的敲除雜合子小鼠。

通過ES細胞打靶技術，構建一個常規(guī)基因敲除小鼠模型一般需要7-12個月。

構建以篩選基因新霉素（Neo）取代靶基因的一個或多個外顯子的重組載體，轉入ES細胞，獲得正確發(fā)生同源重組的ES克隆。ES細胞進行囊胚注射，獲得部分ES來源的嵌合鼠，嵌合鼠與野生型小鼠交配，最終獲得來源于重組ES細胞的雜合子小鼠。雜合子小鼠一條染色體上的靶基因指定外顯子被Neo基因所取代，雜合子交配獲得靶基因失活的純合子小鼠。