細小病毒B19 IgM ELISA試劑盒使用說明書

DRG 細小病毒B19 IgM ELISA試劑盒
（德國DRG原裝進口，貨號：EIA3504）

 

DRG公司的吸小病毒B19 IgM酶免試劑盒可用于人血清中抗細小病毒B19 IgM抗體的定性和定量檢測。此試劑盒僅供體外診斷用，在美國，此試劑盒僅供研究用。

 

2、實驗原理
DRG公司的細小病毒B19 IgM ELISA試劑盒是一種固相的酶聯免疫吸附實驗，包被板的微孔中包被了重組的細小病毒B19抗原）。將稀釋好的病人樣品和即用型的質控品加入到微孔中，溫育期間，陽性樣品和質控品中的細小病毒B19特異性抗體會結合到固相抗原上。洗板除去未結合的樣品，再微孔中加入辣根過氧酶標記的抗人IgM抗體。在第二次溫育中，IgG酶聯物會結合到這些特異性的IgM抗體上而產生酶聯免疫復合物。第二次洗板除去未結合的酶聯免疫復合物。加入TMB底物液后，溶液顯示藍色。之后加入終止液終止酶促反應，此時容易由藍色變成黃色。溶液所顯示的顏色強度與樣品中細小病毒B19特異性IgM抗體的濃度成反比，450nm處讀取OD值。

4、樣品
此實驗中將用到血清，不能使用溶血、黃疸血或脂血樣品。

1.        樣品的采集，血清，靜脈穿刺采集全血，待其凝血，在室溫下用離心機分離血清。未完全凝血前請勿離心，接受了抗凝劑治療的病人樣品可能需要更長的凝血時間。

2.        樣品的儲存：必須蓋住樣本并在實驗之前于２-８℃下可貯存至24小時。樣品需要更長的貯存時間，必須在實驗之前于-20℃下一次性凍存。融化的樣本在檢測之前必須要上下倒置幾次。

3.        樣品的稀釋：實驗開始前，用零標準品按1：100的比例稀釋樣品。10μL樣品+1ml樣品稀釋液，混合，靜置15分鐘，混合均勻。注意：質控品是即用型的，不必稀釋。

 

5、實驗步驟
實驗開始前，按照稀釋步驟稀釋好洗滌液，準備好樣品，確定樣品和標準品的數量。

1.        將所需數目的板條置于板架上，實驗至少做以下幾孔。

1孔（如A1孔），用來做空白孔
1孔（如B1孔），用來做陰性質控
2孔（如C1+D1），用來做臨界質控
1孔（如E1），用來做陽性質控
用戶自己決定質控品和樣品是否做雙孔。

1.        在所有的微孔中加入洗滌液，浸泡5分鐘。棄取孔內反應液，吸水紙上拍干以除去殘余液體。

2.        在B1孔內加入100ul陰性質控，

在C1和D1孔內分別加入100ul臨界質控
在E1孔內加入100ul陽性質控
在相應的樣品孔內分別加入100ul稀釋好的樣品，A1空白孔不用加。

1.        蓋板，室溫溫育(22-25℃)60分鐘。

2.        棄去孔內的反應液。用稀釋好的洗滌液洗板3次（每孔300ul），在吸水紙上把板拍干以除去殘余液體。注意：洗板步驟是否正確會明顯影響實驗的靈敏度和精密度。

3.        加100μl的酶聯物于各孔中，除A1孔。

4.        蓋板，室溫溫育(22-25℃)30分鐘。

5.        棄去孔內的反應液。用稀釋好的洗滌液洗板3次（每孔300ul），在吸水紙上把板拍干以除去殘余液體。注意：洗板步驟是否正確會明顯影響實驗的靈敏度和精密度。

6.        每孔加100μl底物液。

7.        蓋板，室溫避光溫育(22-25℃)15分鐘。

8.        每孔加100μl終止液，溶液由藍色變成黃色。

9.        加終止液后30分鐘內在450nm波長讀取OD值。

6、實驗的有效性
如果實驗能滿足如下標準則認為實驗有效：
空白孔A1：OD值低于0.100
陰性質控B2孔：OD值低于0.200
臨界質控（CO）C1/D1：OD值在0.250-0.600之間
陽性質控E1孔：OD值必須大于臨界質控
7、結果計算
臨界質控平均吸光度值（CO）
計算兩個臨界質控的平均OD值，如（0.44+0.45）/2=0.445=CO
8、結果說明
陽性：病人樣品的平均OD值比臨界OD值高20%以上的樣品，（病人樣品OD＞1.2倍CO）
灰區(qū)：病人樣品的平均OD值在120%CO和90%CO范圍內的樣品，（0.9倍CO≤人樣品OD≤1.2倍CO＝。將灰區(qū)樣品重新檢測，如果樣品OD仍位于灰區(qū)，則樣品為陰性樣品。
陰性：病人樣品的平均OD值比臨界OD值低10%以上的樣品，（人樣品OD＜0.9倍CO＝。
 
結果按DRG單位計算（DU）
病人樣品平均OD值*10/CO=DU（DRG 單位）
例如：1.580*10/0.445=35DU
結果說明：
臨界值：10DU
灰區(qū)：9-12DU
陰性：＜9DU
陽性：＞12DU

 

本譯文僅供參考，詳情請以原文為準。