人白蛋白（ALB）elisa試劑盒操作步驟

人白蛋白（ALB）elisa試劑盒原理:
采用雙抗體夾心法測定人白蛋白（ALB）水平。用純化的人白蛋白（ALB）抗體包被微孔板，制成固相載體，實驗時依次在微孔板中加入樣本及標準品，并加入HRP標記的ALB抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，反復(fù)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化為藍色，再用硫酸終止反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成黃色。顏色的深淺和樣品中的ALB含量呈正相關(guān)。采用酶標儀在450nm波長測定吸光度（OD值），根據(jù)標準曲線，計算測試樣品中ALB濃度。    

人白蛋白（ALB）elisa試劑盒操作步驟：
1.   取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。
2.   分組：取出96孔板，根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標準品組（6個濃度）、空白孔、待測樣品組。
標準品的稀釋：準備小試管6 只，依次編好號碼，先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul，然后取原濃度標準品100ul加入一只已編好號的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號標準品。稀釋后各管濃度分別是：1000 pg/ml,500 pg/ml,250 pg/ml, pg/ml,125pg/ml,62.5pg/ml,0 pg/ml。
注：為減少實驗誤差，保證準確性，建議設(shè)置復(fù)孔。
3.   加樣：依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標記的抗ALB 抗體10ul。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。
6.   加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液（空白對照孔除外）。
7.   溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時。
8.   洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標板5次，用吸水紙徹底拍干。
9.   顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。
10.   終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘，加入50ul終止液。
11.   讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。
注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)，以免影響準確性。