原代細(xì)胞的脂類(lèi)染色方法蘇丹紅Ⅲ染色法
原理:
蘇丹紅染料在脂類(lèi)物質(zhì)中的溶解度大于其在溶劑中的溶解度,如果染料與含有脂類(lèi)的試樣接觸,便有大量染料進(jìn)入脂類(lèi)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)內(nèi),使這些結(jié)構(gòu)呈紅色。多用蘇丹紅染料、油紅O、尼羅藍(lán)等溶于脂類(lèi)的染料染色,使脂質(zhì)呈色。也可用四氧化鋨染色,脂肪酸或膽堿可使四氧化鋨還原為二氧化鋨而呈黑色。
配制試劑:
1.蘇丹紅Ⅲ染色液:將1g蘇丹紅Ⅲ溶于加溫的70%乙醇溶液中過(guò)濾備用;
2.甲醛鈣固定液:將10ml甲醛和1g CaCl2混合加水至100ml;
3.甘油明膠:將12g明膠加入120ml蒸餾水中水浴加熱使其完全溶解,再加入60ml甘油和1g苯酚,充分混勻后即得。于4℃儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?/DIV>
染色步驟:
1.用Hanks液漂洗蓋玻片3次;
2.用甲醛鈣固定液固定20min;
3.用蒸餾水漂洗蓋玻片3次;
4.用70%乙醇將蓋玻片沖洗3次;
5.用蘇丹紅Ⅲ染色液覆蓋蓋片樣品,染色10—30min;
6.用70%乙醇漂洗蓋片3次;
7.用甘油明膠封片后觀察;
結(jié)果:
原代細(xì)胞含脂類(lèi)的區(qū)域呈橘紅色;