甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性,它是在擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的。MSAP技術(shù)相對(duì)其他測(cè)定DNA甲基化程度技術(shù)有如下優(yōu)點(diǎn):(1)不需知道被測(cè)DNA的序列信息,在不同生物上具有通用性,可用于DNA序列背景知識(shí)未知的生物。(2)操作相對(duì)簡(jiǎn)便,在AFLP技術(shù)體系的基礎(chǔ)上不需要太大改進(jìn),即可操作。(3)可在全基因組范圍檢測(cè)CCGG位點(diǎn)的胞嘧啶甲基化變化。MSAP技術(shù)的局限性在于不能完成非CCGG位點(diǎn)的胞嘧啶甲基化。
MSAP的選擇擴(kuò)增產(chǎn)物目前主要通過(guò)兩種方法進(jìn)行分離檢測(cè),傳統(tǒng)的聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)的方法和自動(dòng)化程度較高的毛細(xì)管凝膠電泳(FISH)進(jìn)行檢測(cè)。
PAGE方法主要是優(yōu)點(diǎn)是引物可以是普通引物,價(jià)格相對(duì)較低,適用于少量樣本或者大量樣本的引物篩選比較合適,另外還可以對(duì)差異條帶進(jìn)行克隆測(cè)序,獲得差異條帶的序列信息。
毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法的優(yōu)點(diǎn)是自動(dòng)化,可以對(duì)大量樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn),速度快,后期的條帶讀取可以依靠軟件,降低了人為讀取的標(biāo)準(zhǔn)不一。
1)MSAP實(shí)驗(yàn)路線(xiàn)
前期確認(rèn)階段:試驗(yàn)樣本類(lèi)型,數(shù)量,引物,簽訂試驗(yàn)合作合同;
試驗(yàn)階段:DNA提取,酶切,預(yù)擴(kuò)增,選擇性擴(kuò)增,電泳檢測(cè);若需要克隆,進(jìn)行目的條帶的回收并測(cè)序(周期視工作量而定);
數(shù)據(jù)分析:和客戶(hù)詳細(xì)溝通,確認(rèn)分析方案:讀取01矩陣;
2)目前已經(jīng)進(jìn)行的樣本類(lèi)型:
樹(shù)木,草,花卉,昆蟲(chóng),魚(yú)類(lèi),蝦類(lèi)等
3)客戶(hù)須知:
本公司需要簽訂技術(shù)服務(wù)合作合同;
本公司再試驗(yàn)結(jié)束后,如沒(méi)要求,試驗(yàn)樣本將統(tǒng)一銷(xiāo)毀;
本公司不接受具有致病性和潛在危險(xiǎn)的原始樣本,此類(lèi)樣本請(qǐng)您提供樣本DNA。
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北京博友順生物技術(shù)有限公司,經(jīng)過(guò)幾年的發(fā)展公司更專(zhuān)業(yè)于分子標(biāo)記技術(shù)服務(wù)。公司致力于:基因組SSR引物開(kāi)發(fā)、AFLP檢測(cè)、SSR/STR技術(shù)服務(wù)、ISSR、MSAP、SNP基因分型、條形碼分析、克隆分子實(shí)驗(yàn)。本著“質(zhì)量第一,服務(wù)至上”的原則為各大院校、醫(yī)院、科研院所等單位,提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和服務(wù),最大程度的滿(mǎn)足用戶(hù)的需要。
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