多重PCR(multiplex PCR),又稱多重引物PCR或復(fù)合PCR,它是在同一PCR反應(yīng)體系里加上二對(duì)以上引物,同時(shí)擴(kuò)增出多個(gè)核酸片段的PCR反應(yīng)。其反應(yīng)原理,反應(yīng)試劑和操作過程與一般PCR相同,但多重PCR在很多應(yīng)用中有巨大的優(yōu)勢(shì),深受分子診斷領(lǐng)域研究者與開發(fā)者的喜愛:
1.高通量 (每個(gè)反應(yīng)孔可分析更多樣本,產(chǎn)出顯著提高)
2.更低的樣本用量和試劑用量(特別適合珍稀樣品,降低成本)
3.更高的實(shí)驗(yàn)精度,使加樣精度錯(cuò)誤最小化
多重PCR目前也面臨著一些問題: 1.PCR通常需要充分優(yōu)化退火條件,以便對(duì)不同的引物–模板系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)最高效率的擴(kuò)增。這種類型的PCR經(jīng)常受到非特異性PCR產(chǎn)物的影響。嚴(yán)格的熱啟動(dòng)程序和特別優(yōu)化的緩沖溶液系統(tǒng)對(duì)于成功的多重PCR絕對(duì)是非常關(guān)鍵的。
2.多重PCR所面對(duì)的另外一個(gè)挑戰(zhàn)是,不同的引物對(duì)之間,雜交動(dòng)力學(xué)性質(zhì)不同。結(jié)合效率更高的引物能更充分的利用PCR反應(yīng)試劑,從而導(dǎo)致其它PCR產(chǎn)物的減少。這通常會(huì)導(dǎo)致一些本應(yīng)該被擴(kuò)增的產(chǎn)物沒有出現(xiàn)。有一些商業(yè)化的試劑盒經(jīng)過特別的設(shè)計(jì),可以避免這種情況。
Real-time RT-PCR可以通過一步法或者兩步法完成,兩者各有優(yōu)劣。一步法快速的流程,可以迅速的處理多個(gè)樣本,并且易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。操作步驟的減少提高了不同樣本結(jié)果的可重復(fù)性,并且由于減少了操作,降低了樣本被污染的風(fēng)險(xiǎn)。
為此,我們推薦使用Solis BioDyne研發(fā)的高靈敏度、高特異性、高穩(wěn)定性的一步法多重PCR試劑盒-(基于探針),
SOLIScript 1-step Multiplex Probe 試劑盒系列產(chǎn)品:
SOLIScript™ 1-step Multiplex Probe Kit(一步法多重PCR試劑盒-基于探針)可在同一個(gè)管子中高特異性的執(zhí)行cDNA合成與基于探針的qPCR反應(yīng)。更多優(yōu)點(diǎn)如下:
1.卓越的特異性:獨(dú)家改造的耐熱型逆轉(zhuǎn)錄酶,cDNA合成高達(dá)60℃。
2.多重反應(yīng)(高通量):一個(gè)反應(yīng)可同時(shí)分析1-4個(gè)靶標(biāo)。
3.反應(yīng)體系配置,無(wú)需冰塊:專利的蛋白穩(wěn)定技術(shù),即使室溫保存有效期高達(dá)30天。
4.無(wú)懼高GC含量PCR:獨(dú)家優(yōu)化的buffer配方。
5.預(yù)防交叉污染:內(nèi)含dUTP,可匹配尿嘧啶糖苷酶(UNG)使用。
6.廣泛的設(shè)備兼容性:如上表格
多重PCR試劑盒組分:
1.5x One-step Multiplex Probe Mix:HOT FIREPol® DNA聚合酶,反應(yīng)緩沖液, dNTPs(含dUTP), 15 mM MgCl2 (終濃度為3 mM MgCl2)
2.40x One-step SOLIScript Mix:SOLIScript逆轉(zhuǎn)錄酶, RiboGrip RNase Inhibitor(RNase強(qiáng)效結(jié)合蛋白,抑制RNA降解)
3.Water(無(wú)核酸酶)可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示:
對(duì)提取的人來源的總RNA進(jìn)行5個(gè)濃度梯度的10倍稀釋(每個(gè)反應(yīng):4000pg/ul - 0.4pg/ul),各濃度樣品均使用Solis BioDyne的一步法多重PCR試劑盒,同時(shí)分析4個(gè)靶標(biāo)。PCR儀器為:Applied BioSystems™ QuantStudio™ 6 cycler。
除了上述的高端的分子診斷研發(fā)神器,Solis BioDyne為客戶提供終點(diǎn)PCR(end-point PCR),qPCR(real-time PCR),反轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse transcription),以及其它PCR所需的配套試劑。產(chǎn)品線縱覽圖如下:
Solis BioDyne來源于歐盟-愛沙尼亞共和國(guó),自1995年以來,Solis BioDyne一直致力于開發(fā)和生產(chǎn)高品質(zhì)的生命科學(xué)試劑,現(xiàn)已成為當(dāng)今歐洲領(lǐng)先的試劑供應(yīng)商之一。高標(biāo)準(zhǔn)的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)和服務(wù)使Solis BioDyne成為全球值得信賴的首選PCR供應(yīng)商。我們的DNA聚合酶,PCR Master Mixes,qPCR Mixes和其它試劑被全球110多個(gè)國(guó)家的研究者所使用,包括頂級(jí)研究機(jī)構(gòu)和生物技術(shù)公司。
Solis BioDyne擁有獨(dú)家的蛋白質(zhì)穩(wěn)定技術(shù)專利,確保其PCR酶與PCR Mixes產(chǎn)品具有極高的穩(wěn)定性,研究者可以常溫運(yùn)輸以及常溫下配置PCR反應(yīng)體系(無(wú)需冰盒)。即使是室溫放置30天,其酶活性也沒有損耗。
作為Solis BioDyne在中國(guó)的區(qū)域總代理,艾美捷科技有限公司將為中國(guó)客戶提供最全面的Solis BioDyne產(chǎn)品以及訂制服務(wù)。