一步法多重?zé)晒舛�量逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)4種水禽病毒

導(dǎo)讀
全球水禽病毒性疾病呈現(xiàn)出復(fù)雜多變的態(tài)勢(shì)，涉及眾多病原體，對(duì)水禽養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大損害。近年來(lái)，全球水禽病毒性疾病顯著增加，包括鴨坦布蘇病毒（DTMUV）、鴨肝炎病毒（DHV）、番鴨呼腸孤病毒（MDRV）和番鴨細(xì)小病毒（MDPV）的爆發(fā)。這4種新興的水禽傳染病，由于臨床癥狀重疊，鑒別這些疾病頗具挑戰(zhàn)性。因此，開發(fā)一步多重實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)方法是非常必要的。

 文獻(xiàn)解讀：
廣西大學(xué)Chenchen Wang等人近期于Microorganisms（影響因子IF：4.1）發(fā)表了一篇名為《One-Step Multiplex Real-Time Fluorescent Quantitative Reverse Transcription PCR for Simultaneous Detection of Four Waterfowl Viruses》的研究，文章開發(fā)出一種一步多重實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR（qRT-PCR）檢測(cè)方法，能同時(shí)檢測(cè)鴨坦布蘇病毒（DTMUV）、鴨肝炎病毒（DHV）、番鴨呼腸孤病毒（MDRV）和番鴨細(xì)小病毒（MDPV），為水禽病毒病診斷提供了有效工具。

 應(yīng)用亮點(diǎn)：

• 使用Pangaea 6快速熒光定量PCR儀器系統(tǒng)（Aperbio，蘇州，中國(guó)）進(jìn)行反應(yīng)對(duì)單重和多重qRT-PCR反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化，包括引物和探針濃度、退火溫度、擴(kuò)增循環(huán)數(shù)等。

• 該方法具有高特異性、敏感性和重復(fù)性，避免與其他病毒如禽腺病毒（FADV）、傳染性法氏囊病病毒（IBDV）等多種病毒發(fā)生交叉反應(yīng)。

• 臨床樣本檢測(cè)結(jié)果：對(duì)326份臨床樣本檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，四種病毒均有一定陽(yáng)性率，存在多種病毒共感染情況，且該方法與現(xiàn)有檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)果一致性高。

 文章相關(guān)結(jié)果：
標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒pDTMUV、pDHV、pMDRV和pMDPV以最終濃度1：1：1：1混合，再進(jìn)行十倍梯度稀釋至最終濃度2.68×10⁷~2.68×10⁰拷貝/µL（每反應(yīng)5.36×10⁷~5.36×10⁰拷貝），并建立了多重qRT-PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線。

圖例：多重qRT-PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線

特異性、敏感性和重復(fù)性良好：該方法特異性高，對(duì)其他病毒無(wú)交叉反應(yīng)；檢測(cè)限為2.68×10¹copies/μL ；批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于2%。

圖例：特異性測(cè)試結(jié)果

圖例：敏感性測(cè)試結(jié)果