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生物3D打印的原理與實(shí)驗(yàn)方案(一):生物墨水及新興研究方向

瀏覽次數(shù):896 發(fā)布日期:2022-2-23  來(lái)源:锘海生命科學(xué)
3D生物打印是增材制造的一種形式,通過(guò)使用生物兼容性墨水或在其中添加細(xì)胞,使該墨水能夠應(yīng)用于三維組織工程……或許我們已經(jīng)看過(guò)多次這樣的生物3D打印定義。但細(xì)究打印過(guò)程的細(xì)節(jié)、步驟、原理,乃至延申到打印前的細(xì)胞培養(yǎng)和打印后的組織培養(yǎng),或許都只有一個(gè)模糊的概念。因而,Jeremy M. Crook于2020年出版了3D Bioprinting: Principles and Protocols一書(shū),旨在將生物3D打印前后相關(guān)的操作標(biāo)準(zhǔn)化,使科研工作者能夠更為方便地開(kāi)展工作。書(shū)的內(nèi)容正如書(shū)名,分為Principle與Protocol兩大塊,前者介紹相關(guān)概念,以理論內(nèi)容為主;后者則提供實(shí)驗(yàn)步驟,以器官作為章節(jié)分類(lèi)介紹。
 
書(shū)的內(nèi)容以生物3D打印的歷史作為起始。介紹了兩類(lèi)生物3D打印公司:以設(shè)備和應(yīng)用起家、以耗材即生物墨水的開(kāi)發(fā)起家。前者以瑞士regenHU作為代表,也包括德國(guó)Envision Tec(現(xiàn)為美國(guó)Desktop Metal全資子公司)、日本Cyfuse等;后者則以瑞典Cellink為代表(由公司名稱(chēng)也能看出),包括美國(guó)Allevi、Se3D。他們能夠在領(lǐng)域發(fā)展初期,就看到生物墨水與傳統(tǒng)材料的區(qū)別,并開(kāi)發(fā)合適的方法予以轉(zhuǎn)變。在書(shū)中,相對(duì)于傳統(tǒng)材料而言,生物墨水有一下幾個(gè)特點(diǎn):
1、 以可控的方式被擠出,形成柱狀或能維持形狀的液滴等。
2、 在應(yīng)力作用下能夠因剪切稀變特性而發(fā)生流動(dòng),但在沒(méi)有負(fù)載時(shí)則保持形狀。
3、 可以通過(guò)交聯(lián)或自組裝避免被溶解,同時(shí)可以在多層結(jié)構(gòu)或堆疊時(shí)維持形狀。

圖1:生物3D打印中常見(jiàn)的兩種方式——擠出式與噴墨式
 
針對(duì)這些特點(diǎn),需要通過(guò)以下方法使原有的傳統(tǒng)材料轉(zhuǎn)變?yōu)樯锬?/span>
1、 加入增稠劑以提高墨水的黏度,并賦予剪切稀變的特性。
2、 控制溫度:某些材料在一定范圍內(nèi)復(fù)合生物墨水的性質(zhì)
3、 使用支撐材料輔助

另外,作者也提到,使用生物3D打印的一個(gè)較為現(xiàn)實(shí)且迫切的目的,是繞開(kāi)傳統(tǒng)2D組織培養(yǎng)、異體組織移植、器官捐獻(xiàn)等種種帶來(lái)的限制。除了使用細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)生物3D打印解決上述幾個(gè)問(wèn)題外,作者也提到多個(gè)正在引起關(guān)注的研究方向:

1、4D生物打。捍蛴『蟮慕M織仍具有一定的活動(dòng)性,可隨時(shí)間或在刺激物的促進(jìn)下改變性質(zhì)
2、仿生機(jī)器人(Soft Robotics):打印肌細(xì)胞和導(dǎo)電材料制作人工肌肉模型,在給予適當(dāng)刺激后,可使細(xì)胞發(fā)生收縮,成為生化機(jī)器人。
3、器官芯片(Organ-on-a-Chip):在體外進(jìn)行器官小型化,打印出模擬器官,以研究其獨(dú)立或與其他器官之間的功能、活動(dòng)、反應(yīng)或機(jī)理,如藥理學(xué)、毒理學(xué)研究。
4、血管組織(Vascularized Tissues):彌補(bǔ)傳統(tǒng)器官培養(yǎng)中缺乏血管網(wǎng)絡(luò),難以真實(shí)模擬體外器官的缺陷。

圖2:得益于生物3D打印,科學(xué)家可以在體外構(gòu)建更貼近真實(shí)情況的復(fù)雜血管網(wǎng)

同時(shí),生物3D打印也較為適合在GLP(good laboratory practice,藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范,在生物3D打印領(lǐng)域可譯為良好實(shí)驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范)甚至GMP(Good Manufacturing Practice,藥物生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范,在生物3D打印領(lǐng)域可譯為良好生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范)規(guī)范下進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化,從而可控地完成組織構(gòu)造。
 
參考文獻(xiàn):
[1] Estermann M., Bisig C., Septiadi D., Petri-Fink A., Rothen-Rutishauser B. (2020) Bioprinting for Human Respiratory and Gastrointestinal In Vitro Models. In: Crook J. (eds) 3D Bioprinting. Methods in Molecular Biology, vol 2140. Humana, New York, NY.https://doi.org/10.1007/978-1-0716-0520-2_13.

[2] Luo Y, Elumalai A, Humayun A, et al. Understanding Cancer Cell Behavior Through 3D Printed Bone Microenvironments[M] 3D Bioprinting in Medicine, 2019, 163-189.

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