實(shí)驗(yàn)秘笈--最亮的細(xì)胞轉(zhuǎn)染怎么做？

A：分析：主要是鋪板和反應(yīng)液配制的原因

⇒ 細(xì)胞狀態(tài)是整個(gè)實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，如果細(xì)胞狀態(tài)不好，則轉(zhuǎn)染后細(xì)胞狀態(tài)當(dāng)然就好不了

⇒ 鋪板：過(guò)多或不均勻，細(xì)胞長(zhǎng)的太滿(mǎn)就會(huì)狀態(tài)較差

⇒ 脂質(zhì)體本身有毒性，如果脂質(zhì)體加入量太多，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)較差，或者細(xì)胞死亡，建議在做正式實(shí)驗(yàn)前，先做一下預(yù)實(shí)驗(yàn)，摸索一下質(zhì)粒和脂質(zhì)體的配比。

A：分析：主要是細(xì)胞原因和“搬運(yùn)”過(guò)程中的問(wèn)題

❶. 細(xì)胞狀態(tài)仍然是重中之重，如果有一段時(shí)間轉(zhuǎn)染效果很不理想，必須要換一批次細(xì)胞；

❷. 加入目的質(zhì)粒后輕輕混勻，太用力會(huì)破壞混合液的結(jié)構(gòu)，

❸. 質(zhì)粒與轉(zhuǎn)染試劑的比值： 過(guò)高一部分質(zhì)粒不能進(jìn)入細(xì)胞，過(guò)低“搬運(yùn)工”太多，有毒性且浪費(fèi)；

❹. 吸、打液體時(shí)注意槍頭內(nèi)液面高度，是否完全打出；

❺. 反應(yīng)液配好后等待20min，質(zhì)粒才會(huì)被完全包裹；

❻. 反應(yīng)液滴加加入細(xì)胞，使“脂質(zhì)體+質(zhì)�！本鶆蚍植�；

❼. 質(zhì)粒反復(fù)凍融影響濃度，盡量減少凍融次數(shù)；脂質(zhì)體 -20℃保存，用完應(yīng)馬上放回；

❽. 必要時(shí)需要檢測(cè)一下質(zhì)粒的濃度是否準(zhǔn)確；

轉(zhuǎn)染需48h，可以提前知道轉(zhuǎn)染的效果嗎？

根據(jù)經(jīng)驗(yàn)轉(zhuǎn)染24h時(shí)的熒光效果至少達(dá)到下圖水平那么基本上不用擔(dān)心了~