培養(yǎng)NK-92依賴性自然殺傷細胞系的注意事項
NK-92細胞是一種白細胞介素-2 (IL-2) 依賴性自然殺傷細胞系， 1992年建立于一名患有快速進展性非霍奇金淋巴瘤的 50 歲白人男性的外周血單核細胞。NK-92細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562細胞和Daudi細胞。NK-92細胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細胞的功能。幾十年來，它在癌癥治療、免疫學和毒理學等研究領(lǐng)域中發(fā)揮著重要作用。
然而，作為一種懸浮生長且有著諸多特性的細胞系，想養(yǎng)好NK-92細胞就需要注意很多小的細節(jié)，否則很可能耗費大量時間卻發(fā)現(xiàn)它“一點不給面子”。以下幾招是“馴服”它的“秘籍‘，不要錯過哦！
白細胞介素-2 (IL-2)質(zhì)量
白細胞介素-2 (IL-2)是配制NK-92細胞完全培養(yǎng)基的必要組成成分。NK-92細胞的增殖依賴高質(zhì)量的IL-2，如果IL-2的質(zhì)量不好或者濃度不夠，會讓細胞增殖受限甚至完全凋亡，這一點是重中之重哦！除此之外，對完全培養(yǎng)基進行分裝也是必要的，可以減少IL-2及其它有效成分的降解。
秘密武器--沉降法
NK-92是種非常“團結(jié)“的細胞，它們成長過程中需要”互幫互助“，一旦細胞個體脫離”團體“，將會停止增殖直至死亡。所以，在換液、傳代及凍存過程中，不建議使用離心的方法去除舊的培養(yǎng)基（離心重懸過程會打散部分細胞團）。建議在換液分瓶或者凍存時采用”沉降法“—將培養(yǎng)基連同細胞團輕柔轉(zhuǎn)移至一個15ML尖底離心管中，靜置10-20分鐘，待細胞團沉降至離心管底部后小心去除舊的培養(yǎng)基（在不吸到細胞團的情況下盡量多地去除舊培養(yǎng)基）。如此操作，可以最大限度保留細胞團，維持細胞活力。
換液頻率
復(fù)蘇初期細胞團小而少，活力較差。因此，避免頻繁換液對細胞恢復(fù)活力是很重要的。在復(fù)蘇后的一周內(nèi)只需換1-2次液，同樣需采用上文提到的“沉降法“，除此之外，第一次換液可”半換液“—即細胞沉降后保留靠近底部的1/2培養(yǎng)基，補加等量新鮮培養(yǎng)基即可。待細胞活力恢復(fù)，增殖旺盛時，視細胞密度及培養(yǎng)基顏色每2-3天換液一次。
傳代及凍存操作要點
傳代及凍存操作需要細胞處在增殖旺盛的“對數(shù)生長期“，并且達到一定密度。對于NK-92這種聚團懸浮細胞來說，密度包含了兩個方面--細胞團在培養(yǎng)基中的密度和細胞團中聚集個體數(shù)量的多少。
如果細胞團數(shù)量不多，但是細胞團本身比較大（當在鏡下觀察到細胞團中心發(fā)暗），既不適合傳代又必須處理：可在沉降重懸后輕輕吹打細胞團2-3次，將大的細胞團分散呈小的細胞團以使細胞能正常獲取營養(yǎng)繼續(xù)增殖。如果忽略該操作，將可能導致細胞團短時間內(nèi)解離，細胞大面積死亡。
如果同時滿足以上關(guān)于密度的兩方面要求，即可進行傳代或凍存：沉降細胞后輕輕吹打細胞團2-3次后分瓶或加入凍存液重懸、凍存。
細胞碎片很多怎么辦？
由于細胞特性，細胞碎片的出現(xiàn)在培養(yǎng)NK-92的過程中是常見且正常的，數(shù)量少時不會影響細胞增殖。如果數(shù)量非常多，使用咱們的“秘密武器“--沉降法進行一次換液就可以啦！大量碎片會懸浮在上清中被去除掉。
給大家推薦一下NK-92的完全培養(yǎng)基：貨號：ZQ-801，主要成分 ：MEM α基礎(chǔ)培養(yǎng)基；12.5%heat-inactivated horse serum，12.5%FBS（AU0600），1%PS，0.2mMinositol，0.1mM β-Mer，0.02mMfolic acid，100-200U/mL recombinant IL-2。
以上就是養(yǎng)好NK-92的“武功秘籍‘啦！希望大家都能養(yǎng)出”白白胖胖“的NK-92細胞哦！
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