其他原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟與事項(xiàng)方法

其他原代細(xì)胞試驗(yàn)步驟：

1、貼壁細(xì)胞用胰酶消化，離心收集。

2、細(xì)胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次，離心收集。試驗(yàn)步驟2再重新作一邊。

3、加入5mlDNA提取緩沖液，（10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS）,混勻。

4、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達(dá)到100ug/ml,混勻，50℃水浴3h,

5、用等體積的酚抽提一次，2500rpm離心收集水相，用等體積的（酚，氯仿，異戊醇）混合物抽提一次，2500r/min離心收集水相

6、用等體積的氯仿，異戊醇抽提一次。加入等體積的5mol/L的LiCL,混勻，冰浴，10min.。

7、2500rpm離心10min.轉(zhuǎn)上清于一離心管中。加入等體積的異丙醇。室溫10min。2500rpm,離心10min。棄上清。

8、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉（PH5.2）與2倍體積-20℃預(yù)冷無水乙醇。-20℃20min。

9、12000r/min,室溫離心5min。棄上清。將DNA溶于適量TE中。

其他原代細(xì)胞注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為 50 次操作

2． 操作時(shí)，須帶手套

3． 石蠟包埋前，組織切片固定，避免使用甲醛類固定劑

4． 所有操作在室溫下進(jìn)行

5． 試劑可以重復(fù)使用

6． 試劑具有腐蝕性，注意操作安全

7． 染色液（Reagent G）出現(xiàn)沉淀，可以溫?zé)帷�攪拌或過濾后使用

8． 染色液（Reagent G）須密封避光，如果變成紅色，則影響染色效果

9． 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面

10．樣品染色避免過度，肉眼可見深紅色即可終止染色

11．可以使用通用型蘇木素復(fù)染試劑盒（GMS80067.1），增強(qiáng)染色對(duì)比度

12．染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察

13．本公司提供系列組織生物化學(xué)成分分析試劑產(chǎn)品