Percoll分離液的使用原理
瀏覽次數(shù):453 發(fā)布日期:2020-3-5
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Percoll分離液的使用原理
1、不同濃度(密度)Percoll分離液的制備: 先用9份Percoll分離液與1份8.5% NaCl混合達(dá)到生理性滲透壓,然后用生理溶液(0.85% NaCl)稀釋到所需濃度。
2、不連續(xù)密度梯度Percoll層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤,除去多余血清,這種預(yù)處理可使逐層疊加的Percoll液平穩(wěn)沿管壁流下,使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置,有時相鄰兩層Percoll比重相差不大時,可將Percoll液放入注射器中,小針頭斜面緊貼管壁,任其自然慢慢流下。
3、裝樣:樣品體積和細(xì)胞濃度根據(jù)不同細(xì)胞而異,一般加樣體積不宜過大,細(xì)胞濃度也不可過高,否則會影響細(xì)胞的分離和回收。
4、離心:一般采用離心力為400g,時間20~25min。由于多層Percoll之間密度差別不大,因此離心機(jī)加速、降速時要慢,要平穩(wěn)。
5、取樣:當(dāng)所要分離的細(xì)胞絕大部分在兩層的界面時,可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細(xì)胞;有時大部分細(xì)胞位于Percoll層中,則需要逐層收集。收獲含有Percoll液的細(xì)胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測用。