土壤酸性轉(zhuǎn)化酶（Solid-Acid invertase, S-AI）試劑盒的使用說明
土壤酸性轉(zhuǎn)化酶（Solid-Acid invertase, S-AI）試劑盒說明書
分光光度法 50 管/24 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：
S-AI 在 pH 為 4.5~5.0（酸性）條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。
測定原理：
S-AI 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與 3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物，在 510nm 有特征光吸收，在一定范圍內(nèi) 510nm 光吸收增加速率與 AI 活性成正比。
自備用品：
可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存;
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 25mL 試劑一充分溶解備用；用不完的試劑 4℃ 保存;試劑三：液體 20mL×1 瓶，4℃保存；
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。
測定步驟和加樣表：
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試劑名稱（μL） |
測定管 |
對照管 |
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風(fēng)干土樣（g） |
0.1 |
0.1 |
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試劑一 |
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800 |
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試劑二 |
800 |
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混勻， 37℃準(zhǔn)確水浴 30min，95℃水浴 10min 左右（蓋緊，以防水分散失），流水冷卻，充分混勻（以保證濃度不變），10000g 25℃離心 10min，取上清液
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上清液 |
700 |
700 |
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試劑三 |
350 |
350 |
混勻，95℃水浴 10min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻， 510nm 處，蒸餾水調(diào)零，記錄各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸餾水稀釋后測定(計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù))，ΔA=A 測定-A 對照。
S-AI 活性計算：
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y = 0.0016x -0.001；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y 為吸光值。單位的定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個 S-AI 活力單位。
S-AI 活力（μg/d /g 土樣）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V 反總÷W÷T ÷1000=240×(ΔA+0.001)
V 反總：反應(yīng)體系總體積：0.8mL；T：反應(yīng)時間，1/48d；W：樣本質(zhì)量，0.1g；1000：1mg=1000μg。
