RNA比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

主要用途

YIJI RNA比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)對(duì)溴苯肼與RNA的特異性結(jié)合反應(yīng)，借助可見(jiàn)光波長(zhǎng)的吸光峰值的變化，比色測(cè)定樣品中RNA的絕對(duì)含量或濃度的技術(shù)方法。其適用于各種原核生物和真核生物的細(xì)胞或組織RNA以及環(huán)境中RNA含量分析。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，簡(jiǎn)易方便，無(wú)需樣品純化，定量準(zhǔn)確。

技術(shù)背景

對(duì)溴苯肼（p-bromophenylhydrazine；PBPH）具有與RNA酸性水解去嘌呤化（depurinated）的磷酸核糖（ribosephosphate），再去磷酸和脫水產(chǎn)生的糠醛（furfural），通過(guò)酸化溶劑萃取后，進(jìn)行特異性反應(yīng)，形成穩(wěn)定、可重復(fù)性的黃色復(fù)合物。同時(shí)有效限制了與DNA釋放的脫氧核糖 （deoxyribose），以及樣本中糖原、甲基糖苷（methyl glucoside）、果糖（levulose）、葡萄糖（dextrose）等單糖分子發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生的干擾。對(duì)溴苯肼方法較之苔黑酚（orcinol）反應(yīng)更為特異。通過(guò)可見(jiàn)光（450nm）吸收進(jìn)行定量分析RNA。

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI水解液（Reagent A） 毫升

YIJI酸化液（Reagent B） 毫升

YIJI萃取液（Reagent C）      毫升

YIJI反應(yīng)液（Reagent D）      毫升

YIJI穩(wěn)定液（Reagent E）      毫升

YIJI標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）        毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)                    1份

保存方式

保存YIJI標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；試劑具有強(qiáng)力腐蝕性，注意操作安全，且避免光照，有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

干式恒溫儀或電熱爐：用于反應(yīng)物孵育

臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作

3毫升玻璃比色皿：用于比色分析的容器

分光光度儀：用于樣品比色測(cè)定

實(shí)驗(yàn)步驟

• 測(cè)定準(zhǔn)備
• 準(zhǔn)備好待測(cè)樣品，置于冰槽里
• 設(shè)定好分光光度儀：波長(zhǎng)450nm，并置零
• 準(zhǔn)備好6個(gè)1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至6號(hào)管
• 按照下表配制標(biāo)準(zhǔn)液
• 放進(jìn)冰槽里備用，避免光照

二、比色測(cè)定

• 準(zhǔn)備至少7個(gè)新的15毫升錐形離心管作為測(cè)定管：標(biāo)記6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管和1個(gè)待測(cè)樣品管
• 分別加入xx微升上述配制的YIJI標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent F）到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定管里（注意：濃度和管號(hào)對(duì)號(hào)入座）
• 加入500微升待測(cè)樣品到樣品測(cè)定管里
• 分別加入xx微升YIJI水解液（Reagent A），混勻
• 煮沸30分鐘或放進(jìn)100℃干式恒溫儀孵育60分鐘（注意：小心加熱過(guò)程中蓋子打開(kāi)）
• 在室溫下靜置，直至試管溫度降溫到室溫（15至30分鐘）
• 分別加入xx毫升YIJI酸化液（Reagent B）到所有測(cè)定管里
• 分別加入xx毫升YIJI萃取液（Reagent C）
• 煮沸60分鐘或放進(jìn)100℃干式恒溫儀孵育3小時(shí)（注意：小心加熱過(guò)程中蓋子打開(kāi)）
• 在室溫下靜置，直至試管溫度降溫到室溫（15至30分鐘）
• 分別加入xx毫升YIJI萃取液（Reagent C）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為10000g
• 小心移取1毫升上層液相液體到新的15毫升錐形離心管
• 加入xx毫升YIJI反應(yīng)液（Reagent D），混勻
• 室溫下孵育1小時(shí)，避免光照
• 加入xx毫升YIJI穩(wěn)定液（Reagent E），混勻
• 轉(zhuǎn)移到3毫升玻璃比色皿
• 放進(jìn)分光光度儀讀數(shù)：獲得吸光讀數(shù)
• 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為吸光單位（OD）；橫座標(biāo)（X軸）為標(biāo)準(zhǔn)RNA含量（微克）
• 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)RNA濃度（微克）
• 樣品實(shí)際RNA濃度：

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為10次樣本操作
• 本產(chǎn)品檢測(cè)范圍在9至150微克
• 操作時(shí)，須戴手套
• 系統(tǒng)操作時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定只需1次
• 試劑具有腐蝕性，嚴(yán)格注意操作安全
• 待測(cè)樣品無(wú)需純化，包括去蛋白、去糖、去DNA等處理
• 計(jì)算實(shí)際濃度時(shí)，不要忘記待測(cè)樣品的稀釋倍數(shù)
• 使用無(wú)水乙醇清洗比色皿
• 本公司提供系列生物大分子定量分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定定量準(zhǔn)確