從引進(jìn)小鼠到繁育過(guò)程的詳細(xì)攻略介紹及注意事項(xiàng)

很多同學(xué)在課題進(jìn)展到一定狀態(tài)后，都會(huì)需要小鼠來(lái)開展后續(xù)實(shí)驗(yàn)。但面對(duì)著珍貴實(shí)驗(yàn)鼠鼠時(shí)，新晉鏟屎官們常常手足無(wú)措，無(wú)從下手。小鼠狀態(tài)越來(lái)越差不說(shuō)，甚至出現(xiàn)斷種的情況。

既然想要成為一個(gè)合格的鏟屎官，就該盡早做好準(zhǔn)備。今天鼠博士就給大家講述引進(jìn)小鼠時(shí)需考慮的幾大問(wèn)題。建議每個(gè)新晉鏟屎官都收藏一下~
 

• 明確小鼠背景：常見近交系小鼠品系有C57BL/6（毛色為黑色） 、BALB/c（毛色為白色）、FVB（毛色為白色）、ICR（毛色為白色）等

• 明確小鼠類型：小鼠為野生型小鼠、無(wú)菌鼠還是基因編輯小鼠，小鼠免疫系統(tǒng)是否健全等。

確定小鼠飼養(yǎng)環(huán)境：

• 詢問(wèn)小鼠來(lái)源機(jī)構(gòu)（實(shí)驗(yàn)室/供應(yīng)商）小鼠合適飼養(yǎng)環(huán)境。根據(jù)國(guó)務(wù)院批準(zhǔn)的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》，按照相應(yīng)的微生物控制標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四級(jí)：一級(jí)，普通級(jí)動(dòng)物 conventional (CV) animal；二級(jí)，清潔級(jí)動(dòng)物clean (CL) animal；三級(jí)，無(wú)特定病原體級(jí)動(dòng)物specific pathogen free (SPF) animal；四級(jí)，無(wú)菌級(jí)動(dòng)物germ free (GF) animal。

• 確認(rèn)小鼠合適飼養(yǎng)環(huán)境后，聯(lián)系動(dòng)物房/動(dòng)物中心詢問(wèn)相應(yīng)等級(jí)小鼠如何引進(jìn)，按照不同單位各自流程辦理引入外來(lái)小鼠流程。

• 根據(jù)引入小鼠類型與數(shù)量，提前準(zhǔn)備好合適的籠位數(shù)

水和食物的供應(yīng)：

• 根據(jù)小鼠與實(shí)驗(yàn)需求，準(zhǔn)備好合適的飼料與水。

• 飼料：常規(guī)小鼠使用常規(guī)生長(zhǎng)繁殖飼料即可（脂肪含量為6％），其他特殊情況視情況而定。飼料需滅菌，滅菌方式可選擇高溫高壓滅菌、輻照滅菌等。

• 飲用水：可使用pH2.5-3.0的酸化水、高壓無(wú)菌水、純化水等。

 

引進(jìn)小鼠時(shí)：
確定小鼠基本信息：

• 了解小鼠編號(hào)標(biāo)記的方法，便于準(zhǔn)確辨認(rèn)小鼠：
  (1) 斷趾編號(hào)法：斷趾法是最常見的編號(hào)方法，根據(jù)對(duì)新生小鼠前肢 4 趾，后肢 5 趾的切斷位置來(lái)進(jìn)行編號(hào)。
  (2) 耳標(biāo)法：用專門的耳孔機(jī)在小鼠耳朵上打孔或造成缺口，或者用剪刀在耳朵邊緣剪出不同的缺口進(jìn)行編號(hào)。
  (3) 染色法：用毛筆或棉簽蘸取化學(xué)藥品，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體表不同部位涂上斑點(diǎn)，以示不同編號(hào)。常用染液有：3–5% 的苦味酸溶液（黃色）；0.5% 的中性品紅溶液（紅色）；2% 的硝酸銀溶液（咖啡色）。

• 檢測(cè)小鼠編號(hào)、數(shù)量、性別、周齡、基因型等基本信息是否與標(biāo)簽相符。

觀察小鼠基本情況：

• 皮毛：有無(wú)光澤、豎毛、出血、污物、脫毛。
• 眼：有無(wú)分泌物、流淚、白內(nèi)障、角膜損傷。
• 口腔：有無(wú)流涎、出血。
• 耳：有無(wú)外傷、耳殼曲折、耳部炎癥。
• 四肢：有無(wú)外傷、彎曲、脫臼、腫脹、關(guān)節(jié)炎癥。
• 肛門：有無(wú)排泄殘留物、血便、脫肛。
• 精神和食欲：沉默、倦怠、動(dòng)作不活潑、食欲不振、拒食。
• 營(yíng)養(yǎng)狀況：消瘦、過(guò)度肥胖、成長(zhǎng)異常。
• 姿勢(shì)和步態(tài)：姿勢(shì)異常、行走和站立困難、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、跛行。

穩(wěn)定小鼠狀態(tài)：

• 小鼠在引入后需經(jīng)過(guò)環(huán)境適應(yīng)期3-5天后，方可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。
• 盡量減少噪音、振動(dòng)、氣味干擾，輔助小鼠盡快適應(yīng)新環(huán)境。

復(fù)核小鼠基因型

• 詢問(wèn)小鼠來(lái)源機(jī)構(gòu)（實(shí)驗(yàn)室/供應(yīng)商）小鼠基因型具體檢測(cè)方案，購(gòu)買相應(yīng)試劑
• 將引進(jìn)小鼠剪尾，復(fù)核基因型，明確小鼠信息，同時(shí)檢驗(yàn)基因檢測(cè)方案是否可行。

引進(jìn)小鼠后：
明確目前實(shí)驗(yàn)需求

• 需要快速使用小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)（訂購(gòu)野生型、動(dòng)物造模模型或大量單一基因型小鼠）
• 需要大量獲得某種基因型小鼠，小鼠處于被積極使用狀態(tài)。（訂購(gòu)繁殖對(duì)自行繁殖）
• 需要維持品系但不擴(kuò)大其規(guī)模，小鼠處于維持狀態(tài)。

設(shè)計(jì)繁育策略并制定種群管理計(jì)劃

• 向小鼠來(lái)源機(jī)構(gòu)（實(shí)驗(yàn)室/供應(yīng)商）了解小鼠繁育特征。小鼠的基本繁育信息可見下表：

• 繁育策略設(shè)定：根據(jù)基因小鼠的類型，參考下面方式，制定繁育籠配繁策略。

（更詳細(xì)的繁育攻略，可閱讀往期推文：【小鼠大學(xué)問(wèn)】養(yǎng)小鼠你要知道的那些事（三）：基因工程小鼠繁育方案）

• 種群管理計(jì)劃制定：根據(jù)實(shí)驗(yàn)小鼠是被積極使用狀態(tài)還是維持狀態(tài)制定繁育籠數(shù)

若小鼠是被積極使用狀態(tài)，盡量使目標(biāo)基因型的比率保持在 1/8 (12.5%) 或更高，并且根據(jù)小鼠所需數(shù)量，結(jié)合懷孕率、 產(chǎn)仔數(shù)、 性別、基因偏差等因素計(jì)算出所需籠位數(shù)。

若小鼠是維持狀態(tài)，保持至少兩代小鼠，每代包括兩到三對(duì)姐妹兄弟的繁殖。在新一代的小鼠被證明有生育能力之前，不要淘汰任何年老繁殖對(duì)。并且需要密切監(jiān)測(cè)繁育性能。除此之外，可考慮對(duì)實(shí)驗(yàn)所用小鼠品系進(jìn)行冷凍保存，便于保存遺傳特性，避免育種失敗等問(wèn)題發(fā)生。

小鼠繁育Tips：
根據(jù)繁育策略建立好繁育籠后，還是會(huì)出現(xiàn)各種各樣的問(wèn)題影響小鼠繁育，遇到問(wèn)題時(shí)可參考下表進(jìn)行改善：

記錄種群信息：
開始飼養(yǎng)小鼠后，小鼠的信息記錄對(duì)于種群管理非常重要，主要在于籠卡與飼養(yǎng)記錄表。

• 籠卡分為飼養(yǎng)籠與繁殖籠，兩者包含信息見下表：

參考如下

 

• 飼養(yǎng)記錄：

除了籠卡以外，我們還要用表格把所有的小鼠情況匯總記錄下來(lái)，可以包括小鼠的編號(hào)、出生日期、代次、性別、基因型信息、親代小鼠信息、交配日期、目前狀態(tài)、體重信息等等，便于統(tǒng)計(jì)與管理。

小鼠基因型鑒定
小鼠基因組鑒定也是常常困擾新晉鏟屎官的點(diǎn)，鼠博士這邊的建議是，首先按照小鼠來(lái)源機(jī)構(gòu)（實(shí)驗(yàn)室/供應(yīng)商）小鼠基因型具體檢測(cè)方案來(lái)執(zhí)行，若還有一些問(wèn)題，可以參考下表進(jìn)行改進(jìn)。

希望這篇文章可以對(duì)新晉鏟屎官的你能有所幫助，不用走太多彎路！如果您還有這方面的疑問(wèn)，隨時(shí)歡迎您聯(lián)系我們！

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上海南方模式生物科技股份有限公司（Shanghai Model Organisms Center, Inc.，簡(jiǎn)稱"南模生物"），成立于2000年9月，是一家上交所科創(chuàng)板上市高科技生物公司（股票代碼：688265），始終以編輯基因、解碼生命為己任，專注于模式生物領(lǐng)域，打造了以基因修飾動(dòng)物模型研發(fā)為核心，涵蓋多物種模型構(gòu)建、飼養(yǎng)繁育、表型分析、藥物臨床前評(píng)價(jià)等多個(gè)技術(shù)平臺(tái)，致力于為全球高校、科研院所、制藥企業(yè)等客戶提供全方位、一體化的基因修飾動(dòng)物模型產(chǎn)品解決方案。