組織切片染色操作全過(guò)程講解及其在病理診斷分析中的作用

對(duì)于病理診斷與分析來(lái)說(shuō)，組織切片染色技術(shù)是不可或缺的一項(xiàng)基本功。組織切片染色技術(shù)是指將組織、器官、細(xì)胞等樣品切成通常約5μm至30μm的薄片，對(duì)其進(jìn)行染色處理，以便后續(xù)在顯微鏡下觀察和研究。利用該項(xiàng)技術(shù)，研究人員可以在顯微鏡下觀察和研究組織的結(jié)構(gòu)和組成，還可以檢查是否有異常細(xì)胞或病理變化，以觀察診斷某些疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

今天，小編將借助南模生物病理平臺(tái)的研究案例，向大家簡(jiǎn)要介紹一份組織染色切片的誕生全過(guò)程：

01 制片第一條，材料應(yīng)精挑細(xì)選
實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌�，選擇的組織和器官也是不同的，不同的組織器官在形態(tài)、結(jié)構(gòu)及細(xì)胞組成等方面均存在差異。選擇合適的研究對(duì)象，是病理分析過(guò)程中獲得有效科研數(shù)據(jù)的關(guān)鍵。南模生物病理平臺(tái)專業(yè)團(tuán)隊(duì)可以提供大小鼠多種組織器官和胚胎的取材（詳見(jiàn)下表）。
 

例如：下圖為胚胎期14.5天與16.5天的小鼠胚胎（左），以及對(duì)應(yīng)胚胎期的心臟（右）。
 

 

03 染色觀察，三種方法
染色是指用組織化學(xué)試劑或染料對(duì)組織切片進(jìn)行處理，使組織中的不同成分被染上相應(yīng)的顏色或產(chǎn)生不同的折射率，以利于后續(xù)的觀察和分析，幫助觀察者更好地識(shí)別和分辨細(xì)胞和組織結(jié)構(gòu)�；瘜W(xué)染色、免疫組化、免疫熒光是三種常用的染色手段，下面以不同的組織切片染色舉例介紹。

1.化學(xué)染色
包含H&E染色、masson染色等多類，主要是指在組織切片上顯示組織和細(xì)胞中某些特殊化學(xué)成分的技術(shù)，利用無(wú)色的試劑與組織和細(xì)胞中某一成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，在原位生成有色沉淀的產(chǎn)物。

a.H＆E染色即為蘇木精-伊紅染色法( hematoxylin-eosin staining ) ，蘇木精染液為堿性，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。
 

b.Masson三色染色是結(jié)締組織染色中最經(jīng)典的一種方法。染色原理與陰離子染料分子的大小和組織的滲透有關(guān)，染料成分苯胺藍(lán)的分子量很大，進(jìn)入結(jié)構(gòu)疏松的、滲透性高的膠原纖維，使膠原纖維呈藍(lán)色，其他易于小分子滲透的組織被品紅滲透呈紅色。
 

c.普魯氏藍(lán)染色法（鐵染色）主要用于檢測(cè)組織中的鐵和鐵蛋白，在酸性條件下，切片內(nèi)的高鐵鹽與亞鐵氰化鉀作用生成亞鐵氰化鐵，經(jīng)普魯士藍(lán)染色后，鐵呈藍(lán)色，細(xì)胞核呈紅色。
 

d.LFB染色使用的是勞克堅(jiān)牢藍(lán)（Luxol Fast Blue,LFB屬于銅-酞箐染料），一般用于腦、脊髓、外周神經(jīng)髓鞘等組織器官的染色，主要用來(lái)顯示神經(jīng)髓鞘的形態(tài)結(jié)構(gòu)及病理變化。LFB染色后，神經(jīng)髓鞘呈藍(lán)色，背景淡藍(lán)色或近乎無(wú)色。
 

e.PAS染色，又稱碘酸雪夫染色，主要用來(lái)檢測(cè)組織中的糖類。過(guò)碘酸是一種強(qiáng)氧化劑，能把糖類相鄰兩個(gè)碳上羥基氧化成醛基，再用schiff試劑和醛基反應(yīng)呈現(xiàn)紫紅色。
 

f.油紅O染色使用油紅O。這是一種脂溶性的偶氮染料，是很強(qiáng)的脂溶劑和染脂劑，與甘油三酯結(jié)合呈小脂滴狀，使組織內(nèi)的脂肪呈現(xiàn)出橙紅色，常用于染色組織和細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)和脂肪沉淀。一般用于冰凍切片的組織。
 

g.甲苯胺藍(lán)染色，即利用甲苯胺藍(lán)（Toluidine Blue），一種醌亞胺類堿性染料，將細(xì)胞核染為藍(lán)色。肥大細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)含有肝素和組織胺，遇到甲苯胺藍(lán)染色切片可呈紫藍(lán)色。

2.免疫組織化學(xué)染色
免疫組織化學(xué)（IHC）染色是病理學(xué)中的重要工具，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理-抗原抗體反應(yīng)，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究。

免疫組織化學(xué)（IHC）染色是病理學(xué)中的重要工具，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理-抗原抗體反應(yīng)，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究。

例如下圖，對(duì)胰腺進(jìn)行染色，可觀察到hGLP1R（棕色）僅在hGLP1R小鼠的胰島中表達(dá)。
 

3.免疫熒光染色
免疫熒光（IF）染色是一種重要的免疫化學(xué)技術(shù)，可在不同類型組織中檢測(cè)和定位各種細(xì)胞的多種抗原，這是通過(guò)結(jié)合熒光團(tuán)標(biāo)記的特定抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

如下圖：在小鼠脈絡(luò)叢與小腦中檢測(cè)Aβ和Apoe的表達(dá)，紅色信號(hào)為Aβ，綠色信號(hào)為Apoe，藍(lán)色信號(hào)為DAPI。
 

成像方面，我們可以提供組織體式鏡拍照以及全景掃片，包括普通切片全景（明場(chǎng)）、組織芯片全景（明場(chǎng)）、免疫熒光掃描全景（熒光單標(biāo)雙色、三色、四色）。

至此，一份組織染色切片就“新鮮出爐”了。這樣的切片可以幫助研究者們觀察樣本組織形態(tài)，精準(zhǔn)剖析病灶，在病理診斷與分析中起到了至關(guān)重要的作用。

下面小編為大家列舉幾個(gè)病理學(xué)分析具體應(yīng)用案例，以供參考：

04
病理學(xué)評(píng)價(jià)，具體問(wèn)題具體分析
· 代謝功能障礙相關(guān)的脂肪肝病（MASLD）組織病理學(xué)評(píng)價(jià)
MASLD，又稱為非酒精性脂肪肝病（NAFLD），是最常見(jiàn)的慢性肝病之一。NAFLD是一種以肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞脂肪變性和脂肪異常堆積、與胰島素抵抗（IR）密切相關(guān)的代謝應(yīng)激性肝損傷以及某些遺傳因素為特征的全身性疾病，具有復(fù)雜的多因素發(fā)病機(jī)制和異質(zhì)性臨床表現(xiàn)。病理學(xué)的主要表現(xiàn)為脂肪變性、炎癥和纖維化。
 

· 特應(yīng)性皮炎模型病理學(xué)評(píng)價(jià)
特應(yīng)性皮炎（AD）是一種臨床常見(jiàn)疾病，其特征是皮膚屏障功能障礙、炎癥和慢性瘙癢。皮膚病變的特點(diǎn)是T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞明顯浸潤(rùn)等。
 

·  腫瘤組織病理讀片
對(duì)Kras-G12D/p53-R172H自發(fā)肺癌模型小鼠肺組織進(jìn)行切片H&E染色后發(fā)現(xiàn)，該處出現(xiàn)腺管狀增生形成的腫瘤，邊界清晰，分裂相少見(jiàn)�？梢栽\斷：該處形成肺腺瘤。
 

南模生物病理平臺(tái)可提供整套病理服務(wù)，不僅能夠開(kāi)展上述大小鼠解剖、組織脫水包埋、切片、常規(guī)HE染色、免疫組織化學(xué)染色、免疫熒光染色、全景掃片、病理學(xué)評(píng)價(jià)等工作，也可根據(jù)您的要求進(jìn)行個(gè)性化服務(wù)定制。如您有相關(guān)需求，歡迎撥打400-728-0660或者關(guān)注微信公眾號(hào)點(diǎn)擊在線咨詢，我們的專業(yè)團(tuán)隊(duì)將竭誠(chéng)為您服務(wù)！

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