[68Ga]Ga-THP-APN09的臨床前評(píng)估和試點(diǎn)臨床研究

文獻(xiàn)信息
貴州大學(xué)醫(yī)學(xué)院、北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院暨北京市腫瘤防治研究所，核醫(yī)學(xué)科，國家藥監(jiān)局放射性藥物研究與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，惡性腫瘤發(fā)病機(jī)制及轉(zhuǎn)化研究教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室等團(tuán)隊(duì)合作的研究成果Preclinical evaluation and pilot clinical study of [⁶⁸Ga]Ga‑THP‑APN09, a novel PD‑L1 targeted nanobody radiotracer for rapid one‑step radiolabeling and PET imaging（新型PD-L1靶向納米體放射性示蹤劑[⁶⁸Ga]Ga‑THP‑APN09的臨床前評(píng)估和試點(diǎn)臨床研究，用于快速一步放射性標(biāo)記和PET成像）在學(xué)術(shù)期刊《European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging》（JCR Q1, SCI IF 10.057）發(fā)表。平生公司的小動(dòng)物PET/CT（型號(hào)：Super Nova）產(chǎn)品在論文中提供了重要的腫瘤小鼠PET/CT圖像和定量分析。

 該研究的通訊作者為北腫楊志主任、朱華研究員和北京大學(xué)賈兵教授。第一作者為馬小攀博士，周欣醫(yī)師。
 

文獻(xiàn)背景
目的：程序性細(xì)胞死亡蛋白-1/配體-1 (PD-1/L1)阻斷在治療非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者方面取得了突破性進(jìn)展，但目前仍缺乏有效的篩查患者的方法。在這里，作者報(bào)道了一種新的⁶⁸Ga標(biāo)記納米體[⁶⁸Ga]Ga-THP-APN09，用于小鼠模型中PD-L1狀態(tài)的PET成像，并首次在非小細(xì)胞肺癌患者中進(jìn)行了人體研究。

方法：[⁶⁸Ga]Ga-THP-APN09經(jīng)特異位點(diǎn)放射性標(biāo)記制備，無需進(jìn)一步純化。在人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H1975和人PD-L1基因轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞(A549^PD−L1)中完成細(xì)胞攝取測(cè)定。研究了PD-L1在三種腫瘤細(xì)胞型荷瘤小鼠體內(nèi)的狀態(tài)和生物分布。首個(gè)人體臨床轉(zhuǎn)化試驗(yàn)注冊(cè)為NCT05156515。對(duì)接受輔助免疫治療聯(lián)合化療的非小細(xì)胞肺癌患者的安全性、輻射劑量學(xué)、生物分布、示蹤劑攝取與免疫組織化學(xué)染色和主要病理反應(yīng)(MPR)的相關(guān)性進(jìn)行了評(píng)估。

結(jié)果：[⁶⁸Ga]Ga-THP-APN09在室溫和pH為6.0-6.5的條件下，10min內(nèi)獲得了較高的放射化學(xué)產(chǎn)率(>99%)和13.9-27.8 GBq/μmol摩爾活性。細(xì)胞攝取研究的結(jié)果反映了流式細(xì)胞術(shù)觀察到的表面PD-L1表達(dá)水平的變化順序?yàn)?A549^PD−L1>H1975>A549。在小動(dòng)物PET/CT成像中，與PD-L1陰性的A549腫瘤相比，H1975和A549^PD−L1腫瘤的清晰可見比例為8.3:1和2.2:1。離體生物分布研究顯示，腫瘤攝取與PET結(jié)果一致，A549^PD−L1最高，攝取最多(8.20±0.87%ID/g)，其次是H1975(3.69±0.50%ID/g)和A549(0.90±0.16%ID/g)。9例可切除的非小細(xì)胞肺癌患者參加了臨床研究。[⁶⁸Ga]Ga- THP-APN09的攝取主要見于腎臟和脾臟，其次是骨髓的低攝取。輻射劑量在一個(gè)可靠的范圍內(nèi)。腫瘤攝取與PD-L1表達(dá)TPS呈正相關(guān)(rs=0.8763, P=0.019)。MPR患者腫瘤對(duì)[⁶⁸Ga]Ga-THP-APN09 (SUVmax)的攝取高于非MPR患者(中位SUVmax 2.73 vs 2.10, P=0.036，采用Mann-Whitney U檢驗(yàn))。

 結(jié)論：[⁶⁸Ga]Ga-THP-APN09有潛力轉(zhuǎn)化為一種基于試劑盒的放射性示蹤劑，用于快速、簡單、一步、室溫放射性標(biāo)記。該示蹤劑可以檢測(cè)腫瘤中PD-L1的表達(dá)水平，為預(yù)測(cè)PD-1免疫治療聯(lián)合化療的療效提供了可能。需要對(duì)大量病例進(jìn)行確認(rèn)。

實(shí)驗(yàn)方法
小動(dòng)物PET/CT成像及荷瘤小鼠體內(nèi)生物分布
載瘤BALB/c裸鼠經(jīng)尾靜脈注射200μL [⁶⁸Ga]Ga-THP-APN09 (3.7-7.4MBq)，3% (v/v)異氟醚麻醉小鼠，置于1% (v/v)異氟醚連續(xù)顯像床上，進(jìn)行微PET/CT成像(Super Nova PET/CT, 平生醫(yī)療科技有限公司)。PET圖像采集10min，基于CT數(shù)據(jù)進(jìn)行衰減校正重建(CT-AC重建)。在CT圖像上繪制感興趣區(qū)域(ROI)，并進(jìn)一步在PET上進(jìn)行映射。阻斷組小鼠共注射額外量的APN09 (50nmol)。

 為了研究[⁶⁸Ga]Ga-THP-APN09在荷瘤小鼠體內(nèi)的生物分布，將A549、A549^PD-L1和H1975腫瘤小鼠分為非阻斷組和阻斷組(n=3)，靜脈注射200μL [⁶⁸Ga]Ga-THP-APN09 (0.74-1.11MBq/只)。注射后1h處死小鼠，采集血樣和感興趣器官，用γ計(jì)數(shù)器稱重計(jì)數(shù)。阻斷實(shí)驗(yàn)采用APN09 (13nmol/只)共注射。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果
為了驗(yàn)證這些體外結(jié)果，作者對(duì)來自相同三種細(xì)胞系的腫瘤異種移植物進(jìn)行了PET成像。作者觀察到[⁶⁸Ga] Ga-THP-APN09在A549^PD−L1腫瘤中表達(dá)，其次是H1975(圖3A)，腫瘤ROI分析也證實(shí)了這一點(diǎn)(圖3B)。注射后1h, A549^PD−L1、H1975和A549的SUVmax分別為0.89±0.02、0.29±0.02和0.11±0.01(圖3B)。低PD-L1表達(dá)的A549細(xì)胞系的腫瘤表現(xiàn)出相應(yīng)的低放射性示蹤劑攝取。使用[⁶⁸Ga]Ga-THP-APN09，作者在體內(nèi)觀察到A549^PD−L1和H1975異種移植物在PD-L1(-) A549腫瘤上的比例分別為8.3:1和2.2:1，注射后120分鐘腫瘤與肌肉的比例仍然很高(18:1,5:1)。聯(lián)合注射APN09使A549^PD−L1腫瘤中的放射配體積累減少了80%以上(P<0.0001)，達(dá)到與A549腫瘤相似的水平(圖3C)，證實(shí)了[⁶⁸Ga]Ga-THP-APN09在A549^PD−L1異種移植物中積累的特異性。
 

圖3.[⁶⁸Ga]Ga-THP-APN09在雙側(cè)A549和A549^PD−L1腫瘤小鼠和H1975異種移植小鼠中的小動(dòng)物PET圖像(n=3)。(A) A549(藍(lán)色)、H1975(黃色)和A549^PD−L1(紅色)中[⁶⁸Ga]Ga-THP-APN09的顯微PET成像。(B)不同時(shí)間點(diǎn)A549、H1975和A549^PD−L1小鼠器官中[⁶⁸Ga]Ga-THP-APN09的SUV_max。(C)未添加THP-APN09和添加THP-APN09后1h和2h的[⁶⁸Ga]Ga-THP-APN09的SUV_max。

文獻(xiàn)結(jié)論
總之，作者已經(jīng)成功開發(fā)了一種⁶⁸Ga標(biāo)記靶向PD-L1的納米體PET示蹤劑。由于其標(biāo)記過程簡單，標(biāo)記條件溫和，該示蹤劑具有發(fā)展成為基于試劑盒的放射性示蹤劑的潛力。臨床前和初步臨床研究表明，該示蹤劑可以檢測(cè)腫瘤中PD-L1的表達(dá)水平，輻射劑量在可靠范圍內(nèi)。同時(shí)，該示蹤劑提供了預(yù)測(cè)臨床新輔助免疫治療聯(lián)合化療反應(yīng)的可能性，盡管這需要在更大規(guī)模的臨床研究中得到證實(shí)。

使用設(shè)備

                                                  Super Nova^® Micro PET/CT（III 代外觀圖）