Nucleofector技術(shù)的基本原理及使用注意事項

Q

Nucleofector技術(shù)的基本原理是什么？

A

Nucleofector技術(shù)用于原代細(xì)胞和難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系。這是一種基于電轉(zhuǎn)參數(shù)和細(xì)胞類型特異性試劑盒的非病毒轉(zhuǎn)染方法。使用Nucleofector技術(shù)，DNA直接進(jìn)入細(xì)胞核，對于其他底物（如蛋白質(zhì)、siRNA或miRNA等）Nucleofector技術(shù)也能夠提供高效、穩(wěn)健的轉(zhuǎn)染，同時保持高細(xì)胞活力。

 

Q

為什么Nucleofector技術(shù)是瞬時蛋白質(zhì)生產(chǎn)的理想選擇？

A

對于許多懸浮細(xì)胞系，特別是CHO，常規(guī)轉(zhuǎn)染方法的效率非常有限。

 

對于蛋白質(zhì)生產(chǎn)，懸浮細(xì)胞比貼壁細(xì)胞更受青睞，因為它們更容易培養(yǎng)。與傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方法不同，Nucleofector技術(shù)為與蛋白質(zhì)生產(chǎn)相關(guān)的懸浮細(xì)胞系（包括CHO和HEK293）提供了優(yōu)異的轉(zhuǎn)染效率和活性，有助于在幾天內(nèi)產(chǎn)生毫克量。

 

Q

為什么Nucleofector技術(shù)是穩(wěn)定克隆生產(chǎn)蛋白質(zhì)的理想選擇？

A

由于篩選程序和轉(zhuǎn)染后對無血清條件的適應(yīng)，穩(wěn)定克隆的產(chǎn)生通常需要六個月或更長時間。在Nucleofector技術(shù)的幫助下，懸浮細(xì)胞可以在無血清環(huán)境中直接轉(zhuǎn)染，這有助于顯著縮短時間。

 

Q

為什么Nucleofector技術(shù)是原代細(xì)胞和難以轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的理想選擇？

A

Nucleofector技術(shù)可將DNA直接轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，這使得基因表達(dá)不依賴于細(xì)胞分裂。因此，該技術(shù)是原代細(xì)胞，甚至是神經(jīng)元等非分裂細(xì)胞轉(zhuǎn)染的理想工具。在細(xì)胞系和原代細(xì)胞中，在轉(zhuǎn)染后不久產(chǎn)生基因表達(dá)，并且在許多情況下，可以在2-4小時內(nèi)檢測到超過50%的轉(zhuǎn)染效率。

 

Q

試劑盒中陽性對照pmaxGFP質(zhì)粒表達(dá)的GFP蛋白的分子量（MW）是多少？

A

分子量約為27kDa。

 

Q

為了使Nucleofector技術(shù)發(fā)揮作用，需要進(jìn)行哪些優(yōu)化？

A

不需要進(jìn)行過多優(yōu)化。因為Lonza提供特定細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)染試劑和優(yōu)化的電參數(shù)。這些已經(jīng)在Nucleofector設(shè)備中預(yù)先編程。此外，我們的優(yōu)化方案還為您提供了有關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)和處理的建議，以獲得最佳轉(zhuǎn)染結(jié)果。您可以在Lonza官網(wǎng)中找到有關(guān)您感興趣的細(xì)胞類型的詳細(xì)電轉(zhuǎn)相關(guān)信息。

 

Q

當(dāng)感興趣的細(xì)胞沒有可用的優(yōu)化protocol時，該怎么辦？

A

Lonza不斷為越來越多的原代細(xì)胞和細(xì)胞系開發(fā)新的優(yōu)化試劑盒和方案。要獲取最新信息，請查看龍沙的網(wǎng)站或聯(lián)系我們。

 

以上就是Lonza電轉(zhuǎn)實(shí)驗答疑解惑第一彈，后續(xù)小編將陸續(xù)推出更多，希望能幫助各位科研工作者拿捏電轉(zhuǎn)實(shí)驗！