使用電轉(zhuǎn)系統(tǒng)提高轉(zhuǎn)染效率的步驟及技巧

轉(zhuǎn)染5步驟：

第一步：獲取目標細胞

第二步：混合和結(jié)合

轉(zhuǎn)移至Lonza認證的電轉(zhuǎn)杯或電轉(zhuǎn)板條中

第三步：選擇Nucleofector程序，放入電轉(zhuǎn)耗材，按下開始按鈕

第四步：用培養(yǎng)基將電轉(zhuǎn)耗材的細胞轉(zhuǎn)移出來

第五步：轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)M中。Nucleofectionmm電轉(zhuǎn)后3-8小時即可檢驗

提高核轉(zhuǎn)效率8個TIPS：

1.準備好加了新鮮培養(yǎng)基的多孔板，并在實驗前于37°C下預(yù)平衡

2.使用傳代次數(shù)少并具有推薦融合度或密度（對數(shù)生長）的細胞

3.限制胰蛋白酶暴露時間，仔細監(jiān)測細胞分離情況

4.根據(jù)優(yōu)化方案進行細胞計數(shù)并使用適量細胞數(shù)；所用細胞過少可能導(dǎo)致細胞死亡率增加

5.采用高質(zhì)量DNA，使用內(nèi)毒素去除試劑盒進行純化；請通過測定A260:A280比值檢查各質(zhì)粒制備液的純度

6.室溫下以離心速度80-100×g和方案規(guī)定的時間進行離心

7.離心后加入Nucleofector™溶液，混勻溶液/細胞沉淀制備成單細胞懸液，避免對細胞沉淀進行額外操作或用移液器槍頭抽吸

8.Nucleofection™核轉(zhuǎn)后，用核轉(zhuǎn)試劑盒內(nèi)配的一次性移液管在電轉(zhuǎn)耗材中的細胞頂部加入約500μL預(yù)熱培養(yǎng)基