外泌體鑒定同時(shí)做電鏡、NTA、WB的原因

A：1.因?yàn)槟壳巴饷隗w的分離手段很難獲得十分純凈而且單一的外泌體樣品，因此要通過多種實(shí)驗(yàn)來評估外泌體樣品的純度和完整性。2.目前沒有任何一個(gè)單一實(shí)驗(yàn)可以準(zhǔn)確鑒定外泌體的存在、數(shù)量和完整性。

外泌體的鑒定是為了評估研究者對外泌體分離純化的效果，通過不同的實(shí)驗(yàn)評估富集的外泌體樣品中外泌體的存在、數(shù)量和完整性。這是后續(xù)所有實(shí)驗(yàn)的必要前提。

目前鑒定外泌體主要包括三方面實(shí)驗(yàn)，但是三方面實(shí)驗(yàn)在鑒定外泌體的存在、數(shù)量和完整性上分別存在一些缺陷。

電鏡
可以直觀的看到粒子的形態(tài)，因此可以用于鑒定外泌體的存在和完整性，但是包括支原體、鐵蛋白聚團(tuán)、聚乙二醇蛋白聚團(tuán)、溶酶體等的電鏡圖片與外泌體都十分相似，并且電鏡只能展示局部景象。因此，電鏡成像無法區(qū)分外泌體及形態(tài)相近的納米粒子，且不能反映樣品中的外泌體數(shù)量。

NTA
是一種測算粒子群體直徑分布和粒子數(shù)量的計(jì)算方法，它通過光學(xué)原理感知粒子的存在，因此可以確認(rèn)外泌體樣品中的“外泌體”數(shù)量和直徑的群體特征，但是無法確認(rèn)檢測到的粒子是否為外泌體，不能反映粒子形態(tài)，無法將外泌體和其他納米粒子區(qū)分開。因此NTA不能確認(rèn)外泌體的真實(shí)存在和外泌體的完整性。

WB
可以鑒定外泌體中存在的特定蛋白，WB檢測外泌體標(biāo)志蛋白可以說明外泌體成分的存在。但是目前的這些標(biāo)志物蛋白只是會(huì)在外泌體里富集，而并不是外泌體所特有的，諸如CD63、ALIX等在細(xì)胞中都有，在一些細(xì)胞碎片、溶酶體、胞內(nèi)體中也大量存在。因此，WB僅能證實(shí)外泌體成分的存在，無法確認(rèn)外泌體的數(shù)量和完整性。

因此，通過三個(gè)實(shí)驗(yàn)的相互佐證來確認(rèn)外泌體的存在、數(shù)量和完整性。當(dāng)且僅當(dāng)三個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果都正常（即電鏡看到經(jīng)典結(jié)構(gòu)，WB檢測到外泌體標(biāo)志物的富集，NTA測算直徑分布符合外泌體定義），才能確認(rèn)研究者成功的分離純化了外泌體，基于這一成功的分離方法所得到的后續(xù)研究結(jié)果才能認(rèn)為是外泌體相關(guān)的研究結(jié)果。其實(shí)，最好完美的鑒定方法應(yīng)當(dāng)是免疫電鏡結(jié)合NTA，但是免疫電鏡的難度過高，因此最終形成了電鏡、NTA和WB三個(gè)實(shí)驗(yàn)鑒定外泌體的主流共識。