PCR蓋緊蓋子試劑蒸發(fā)問題詳解

導讀

在PCR實驗中，我們加完反應體系后，都會認真仔細的蓋好蓋子，并反復確認已經(jīng)蓋好了蓋子，以避免出現(xiàn)試劑蒸發(fā)的情況�？墒怯袝r候我們也會有一些疑惑：明明已經(jīng)確認蓋子蓋緊了，實驗結束后，還是會出現(xiàn)試劑蒸發(fā)的現(xiàn)象。這是為什么呢？

其實試劑的蒸發(fā)是PCR實驗中常見的問題之一，影響試劑蒸發(fā)的因素也比較多。

蒸發(fā)是指試劑在PCR實驗過程中，反應液在高溫下氣化，又凝結在管壁或頂蓋上，形成水霧或水珠，或直接從管蓋或覆膜的氣隙中溢出，造成反應液濃度變化、反應液量減少，有的甚至蒸干，導致實驗無效等。

影響試劑蒸發(fā)的因素主要有以下三點：

01熱蓋壓力、溫度

在PCR實驗中，我們一般通過加熱蓋的辦法來防止試劑蒸汽的凝結，熱蓋溫度一般比反應液的溫度高，以防止蒸汽凝結。

PCR 儀的熱蓋大致可以分為以下四種：非可調式熱蓋、可調節(jié)式熱蓋、自適應式熱蓋和自動式熱蓋。而可調節(jié)式熱蓋利用手擰壓緊式，擰不緊會發(fā)生試劑蒸發(fā)，通過增加熱蓋壓力可以盡量減少邊緣蒸發(fā)的現(xiàn)象。有時擰得過緊反而可能出現(xiàn)壓壞管子、擰壞旋鈕的情況。通常，采用電動智能熱蓋，能夠自動感應不同高度的耗材，自動壓緊耗材，壓力均勻且恒定，從而能夠減少試劑蒸發(fā)和人工誤差，提高實驗準確度和可重復性。

02耗材形變

對于蒸汽的泄漏，大部分人認為是熱蓋的壓力不夠所致。熱蓋的壓力固然很重要，但這僅僅是一個方面，其實耗材也很關鍵。

PCR 孔板通常為塑料材質，在受熱后發(fā)生膨脹，產生較大地變形，用于放置 PCR 孔板的 PCR 金屬基座則受熱膨脹率極小，PCR 孔板受熱膨脹后不能正常沿平面延展進而中間形成拱起狀態(tài)，從而造成上方熱蓋不能全面地與 PCR 孔板上表面充分接觸，造成溫度、壓力不均，引起 PCR 孔板邊緣試劑的蒸發(fā)，影響 PCR 檢測效果。

03耗材密封不嚴

熱蓋與耗材壓緊并不等于蓋緊了 PCR 管蓋，PCR 孔板質量參差不齊。優(yōu)質的耗材，管口和蓋子表面光滑，盒蓋后密封性好，不易泄漏。而劣質耗材，管口不平，有徑向紋路，容易造成泄漏，甚至蒸干。

因此在PCR實驗中，盡量選擇優(yōu)質、合適的耗材。同時也可以擴大反應體系，盡量減少體系蒸發(fā)對反應的影響。