實驗室操作技能匯總-免疫熒光玻片如何檢測和觀察

什么是免疫熒光技術？

免疫熒光技術（Immunofluorescence technique）又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發(fā)展最早的一種。

免疫熒光方法中主要步驟：

1）冰凍切片制備                2）組織切片固定     3）血清封閉                4）一抗孵育條件

5）二抗孵育條件                6）復染                  7）封片                        8）切片清洗

熒光顯微鏡標本制作要求：

1、載玻片：載玻片厚度應在0.8～1.2mm之間，載玻片必須光潔，厚度均勻，無明顯自發(fā)熒光，有時需用石英玻璃載玻片。

2、蓋玻片：蓋玻片厚度在0.17mm左右，光潔。

3、標本：組織切片或其他標本不能太厚，如太厚激發(fā)光大部分消耗在標本下部。另外，細胞重迭或雜質掩蓋，影響判斷。

4、封裱劑：封裱劑必須無自發(fā)熒光，無色透明，熒光的亮度在pH8.5～9.5時較亮，不易很快褪去。

5、鏡油：必須使用無熒光鏡油。

熒光玻片如何來檢測呢？

熒光顯微鏡是利用一個高發(fā)光效率的點光源，經(jīng)過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長的光(如紫外光365nm或紫藍光420nm)作為激發(fā)光、激發(fā)標本內的熒光物質發(fā)射出各種不同顏色的熒光后，再通過熒光顯微鏡來觀察。

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