培養(yǎng)羊水細胞的步驟方法

體外的羊水細胞與絨毛膜培養(yǎng)是每一個細胞遺傳學(xué)實驗室的重點工作，因為核型分析所需的中期（metaphase）染色體有賴于獲得處于分裂狀態(tài)下的細胞。羊水穿刺與絨毛膜取樣是現(xiàn)今主要的侵入性手段用于胎兒染色體異常的診斷。用于胚胎期診斷化驗中人類羊水細胞和絨毛膜樣品培養(yǎng)的完全培養(yǎng)基，緩沖效果更佳。培養(yǎng)基冷凍包裝。
采用如下方法做羊水細胞原位培養(yǎng)或按其它常規(guī)羊水細胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)羊水細胞：
1、取羊水20ml，以120xg離心十分鐘。
2、在無菌操作臺操作，棄上清液。
3、加入2ml羊水培養(yǎng)基，輕輕 混勻，制成細胞懸液。
4、取35mm培養(yǎng)皿，在蓋子上面及下半部側(cè)壁都做好標(biāo)記。（包括編號、姓名、日期等）
5、滴加0.5ml細胞懸液至培養(yǎng)皿中的蓋玻片（25px2）中央，用移液管尖小心攤開。注意液體不能流出蓋玻片。
6、將培養(yǎng)皿置于5% CO2、濕度飽和的37度培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。
7、24小時后，給每塊蓋玻片補加1.5ml培養(yǎng)基。
8、接種7天后觀察細胞。當(dāng)發(fā)現(xiàn)蓋玻片上細胞克隆數(shù)大于10個，每個克隆細胞數(shù)大于300且克隆邊沿細胞呈旺盛分裂狀態(tài)時，即可收獲細胞。否則，繼續(xù)培養(yǎng)1~2天。當(dāng)克隆邊沿細胞融合度大于90%，呈現(xiàn)停止分裂狀態(tài)時，意味細胞已經(jīng)老化，不適合用作分析。
9、適合收獲的細胞按常規(guī)方法使細胞分裂停止在有絲分裂中期并制作細胞片，經(jīng)吉姆薩染色處理后做染色體核型分析。