BCA蛋白定量法和Bradford蛋白定量法的優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比

目前實(shí)驗(yàn)室里常用的蛋白定量的方法通常主要有三種： BCA蛋白定量、Bradford蛋白定量法和紫外分光法。 

BCA 蛋白定量 的實(shí)驗(yàn)原理是在堿性條件下，H | NH2----C-COOH | R 將Cu²+還原為CU+與 BCA 結(jié)晶為紫色的化合物，再通過測(cè)定 562 nm波長OD值來判定還原劑的含量。

下列表分別對(duì)兩種實(shí)驗(yàn)方法做以對(duì)比：

通過上表中的的對(duì)比，我們不難看出Bradford實(shí)驗(yàn)法的速度比較快，平常BCA 蛋白定量 的孵育時(shí)間大約30分鐘甚至更長，而采用Bradford蛋白定量法則需要幾分鐘即可完成實(shí)驗(yàn)。

雖然其標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性擬合程度不如BCA定量法，但它的二項(xiàng)式契合度卻較高。
（下圖顯示為：二項(xiàng)式的標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法）

除此之外，Bradford 蛋白定量還有一個(gè)小小的缺陷，那就是它比較容易受高濃度的去垢劑影響，比如需要SDS的實(shí)驗(yàn)濃度低于0.01%，TRITON X-100的實(shí)驗(yàn)濃度低于0.005%等。
解決的辦法是：使用與Bradford 兼容的去垢劑，從而匹配到相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)濃度即可。

Bradford蛋白定量實(shí)驗(yàn)雖然實(shí)驗(yàn)在制作二項(xiàng)式標(biāo)線和公式計(jì)算較繁瑣，但如果能成功破解以上三個(gè)問題，那么Bradford法對(duì)比BCA法來說還是有不少優(yōu)勢(shì)的，比如可以節(jié)省很多時(shí)間等。對(duì)于追求實(shí)驗(yàn)效率的實(shí)驗(yàn)員來說，熟練掌握Bradford實(shí)驗(yàn)法是個(gè)不錯(cuò)的選擇。