通用型細(xì)胞周期流式細(xì)胞分析試劑盒產(chǎn)品說明書

通用型細(xì)胞周期流式細(xì)胞分析試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）
 
主要用途
 
通用型細(xì)胞周期流式細(xì)胞分析試劑是一種旨在通過細(xì)胞流式儀測定細(xì)胞中DNA結(jié)合染料程度，來定量DNA含量，以進(jìn)一步獲取細(xì)胞周期分布狀況的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細(xì)胞（動物、人體、植物、昆蟲等）的細(xì)胞周期分析�？梢员挥糜诩�(xì)胞凋亡、信號傳遞、細(xì)胞分裂、代謝等的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，分辨率高，操作簡捷，性能穩(wěn)定。
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技術(shù)背景
 
細(xì)胞周期是評價細(xì)胞代謝、生理和病理狀況的重要指標(biāo)。通過DNA結(jié)合染料，借助細(xì)胞流式儀，測定出DNA含量，根據(jù)DNA含量隨著細(xì)胞周期的不同而發(fā)生變化，來確定和區(qū)別細(xì)胞周期的不同階段。流式細(xì)胞術(shù)（FLOW CYTOMETRY）是七十年代發(fā)展起來的集計算機(jī)、激光、流體力學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、細(xì)胞免疫學(xué)為一體的高科學(xué)技術(shù)。凋亡細(xì)胞是在正常G0/G1峰細(xì)胞群前出現(xiàn)亞二倍體峰（sub-G1）細(xì)胞群。
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產(chǎn)品內(nèi)容
 
清理液（ A）     100毫升
裂解液（ B） 50毫升
染色液（ C）     650微升
去干擾劑（ D）  1毫升
保存液（ E） 50毫升
產(chǎn)品說明書  1份
 
保存方法
 
保存去干擾劑（ D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；染色液（ C）避免光照，有效保證6月
 
用戶自備
 
HANKS平衡鹽溶液（12022）或PBS緩沖溶液（12033）：用于清洗細(xì)胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于細(xì)胞脫離
完全細(xì)胞培養(yǎng)液（12052）：用于中和胰蛋白酶的處理
15毫升錐形離心管：用于細(xì)胞收集的操作
1.5毫升離心管：用于細(xì)胞染色的容器
臺式離心機(jī)：用于細(xì)胞收集的操作
細(xì)胞流式儀：用于細(xì)胞熒光分析
 
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實驗步驟
 
實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的去干擾劑（ D）置入冰槽里融化。移出500微升裂解液（ B）到新的1.5毫升離心管，加入2.5微升染色液（ C）和10微升去干擾劑（ D），混勻后標(biāo)記為1號工作液；再移出500微升保存液（ E）到新的1.5毫升離心管，加入4微升染色液（ C），混勻后標(biāo)記為2號工作液。工作液置于暗室里，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。
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• 準(zhǔn)備1瓶25cm²細(xì)胞培養(yǎng)瓶的待測細(xì)胞，鋪滿率達(dá)70％（約1百萬細(xì)胞數(shù)）
• 小心移出細(xì)胞培養(yǎng)液到15毫升錐形離心管（收集漂浮細(xì)胞）
• 加入2.5毫升用戶自備的HANKS平衡鹽溶液或PBS緩沖溶液到細(xì)胞培養(yǎng)瓶，覆蓋培養(yǎng)瓶表面
• 小心移出2.5毫升清洗液到上述15毫升錐形離心管
• 加入1毫升胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液到細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鋪滿整個培養(yǎng)平面
• 置入37℃培養(yǎng)箱1分種
• 振動培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫落，然后加入5毫升用戶自備的完全細(xì)胞培養(yǎng)液
• 移入到上述15毫升錐形離心管（懸浮細(xì)胞從這一步驟開始）
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升清理液（ A）到15毫升錐形離心管，混勻
• 放進(jìn)臺式離心機(jī)離心5分鐘，速度為300g
• 小心抽去上清液
• 加入500微升1號工作液，用200微升槍頭上下輕柔抽吸，混勻細(xì)胞顆粒群（可以移入到1.5毫升離心管或細(xì)胞流式儀專用測試管）
• 在暗室里室溫下孵育60分鐘
• 加入500微升2號工作液，用200微升槍頭上下輕柔抽吸，混勻
• 移入到細(xì)胞流式儀專用測試管（可放進(jìn)4℃冰箱里待測）
• 即刻進(jìn)行細(xì)胞流式儀分析：波長488nm氬離子激光（或488nm激發(fā)波長，610nm散發(fā)波長），觀察50000個細(xì)胞以上

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