其他原代細胞實驗步驟與事項方法
瀏覽次數:193 發(fā)布日期:2021-3-3
來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
其他原代細胞試驗步驟:
1、貼壁細胞用胰酶消化,離心收集。
2、細胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次,離心收集。試驗步驟2再重新作一邊。
3、加入5mlDNA提取緩沖液,(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混勻。
4、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達到100ug/ml,混勻,50℃水浴3h,
5、用等體積的酚抽提一次,2500rpm離心收集水相,用等體積的(酚,氯仿,異戊醇)混合物抽提一次,2500r/min離心收集水相
6、用等體積的氯仿,異戊醇抽提一次。加入等體積的5mol/L的LiCL,混勻,冰浴,10min.。
7、2500rpm離心10min.轉上清于一離心管中。加入等體積的異丙醇。室溫10min。2500rpm,離心10min。棄上清。
8、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉(PH5.2)與2倍體積-20℃預冷無水乙醇。-20℃20min。
9、12000r/min,室溫離心5min。棄上清。將DNA溶于適量TE中。
其他原代細胞注意事項
1. 本產品為 50 次操作
2. 操作時,須帶手套
3. 石蠟包埋前,組織切片固定,避免使用甲醛類固定劑
4. 所有操作在室溫下進行
5. 試劑可以重復使用
6. 試劑具有腐蝕性,注意操作安全
7. 染色液(Reagent G)出現沉淀,可以溫熱、攪拌或過濾后使用
8. 染色液(Reagent G)須密封避光,如果變成紅色,則影響染色效果
9. 試劑溶液在樣品表面時,避免有氣泡存在,同時確保鋪滿樣品表面
10.樣品染色避免過度,肉眼可見深紅色即可終止染色
11.可以使用通用型蘇木素復染試劑盒(GMS80067.1),增強染色對比度
12.染色完成后,即刻進行光學顯微鏡觀察
13.本公司提供系列組織生物化學成分分析試劑產品