切向流過(guò)濾的脫輔基血紅蛋白的制備新方法

瀏覽次數(shù)：1384　發(fā)布日期：2020-3-20　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

一種基于切向流過(guò)濾的脫輔基血紅蛋白制備新方法

來(lái)自美國(guó)俄亥俄州立大學(xué)等的科學(xué)家們?cè)?020年第117期的《Biotechnology and Bioengineering》雜志上發(fā)表了題為“Novel Manufacturing Method for Producing Apohemoglobin and its Biophysical Properties”的文章。文中，研究人員開(kāi)發(fā)了一種新的、可放大的脫輔基血紅蛋白（apoHb）生產(chǎn)方法，使用酸化乙醇溶液將疏水性血紅素提取到溶液中，并通過(guò)切向流過(guò)濾將血紅素從獲得脫輔基蛋白中分離出來(lái)。結(jié)果顯示，獲得的總蛋白和活性蛋白產(chǎn)量分別為>95%和~75%，且apoHb制備液中殘留的血紅素<1%，SDS-PAGE分析顯示純度>99%。

實(shí)驗(yàn)使用KrosFlo KR2i 切向流過(guò)濾系統(tǒng)和中空纖維過(guò)濾組件。從HB生產(chǎn)apoHb的工藝現(xiàn)在表面積20cm2的MicroKros TFF過(guò)濾器上進(jìn)行，然后規(guī)模放大到表面積1050cm2的MiniKros TFF過(guò)濾器。在兩種規(guī)模條件下，中空纖維均為聚砜材質(zhì)，MWCO 10kD，內(nèi)徑0.5mm，長(zhǎng)度20cm。純化的oxy-Hb（低于5% metHb）添加到含有3 mM HCl的80%（v/v）EtOH/DI水混合液中，獲得最高蛋白質(zhì)濃度2mg/mL。對(duì)于使用MicroKros過(guò)濾器進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，處理18 mg Hb，流速設(shè)置為25 mL/min。對(duì)于MiniKros過(guò)濾器實(shí)驗(yàn)，流速設(shè)置為1.1L/min，包括3個(gè)起始量為1g Hb的批次、3個(gè)1.2g Hb的批次以及8個(gè)2.0 g Hb的批次（以兩根平行的HF組件運(yùn)行）。跨膜壓維持為7±1psi。Hb分散于酸性乙醇溶液后，系統(tǒng)以酸性乙醇連續(xù)洗濾9個(gè)體積。血紅素去除后，無(wú)血紅素的球蛋白以DI水洗濾5個(gè)體積，再以PBS洗濾5個(gè)體積。在MiniKros生產(chǎn)規(guī)模，進(jìn)行最終濃縮步驟，將系統(tǒng)體積降低至最終總蛋白濃度40-115mg/mL。整個(gè)工藝在4±1℃的冷室內(nèi)進(jìn)行。每次運(yùn)行后，TFF組件使用DI水徹底漂洗，再以0.1M NaOH 消毒，并保存在0.1M NaOH中。再次使用前，用DI水充分漂洗，以去除保存液。

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原文：I.S.Pires, D.A.Belcher, R.Hickey, et al., Novel Manufacturing Method for Producing Apohemoglobin and its Biophysical Properties. Biotechnology and Bioengineering, 2020, 117(1): 125-145.