對蝦白斑綜合癥病毒（WSSV）核酸檢測試劑盒（恒溫?zé)晒夥ǎ┦褂谜f明

請于-20℃條件下保存，有效期 12 個月

◆產(chǎn)品說明

動物疫病檢測系列基于獨特的恒溫?zé)晒鈾z測技術(shù)，可針對食品、動物組織等樣品中病毒的特異核酸

片段進(jìn)行擴增，通過實時擴增曲線判定結(jié)果。本產(chǎn)品用于對蝦白斑綜合癥病毒（ WSSV ）的檢測，檢出限為

10²copies/μL 病毒基因組 DNA。

◆產(chǎn)品組成（ 48 測試） 

◆適用儀器

ZYD-S1、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308c 等恒溫?zé)晒鈾z測儀， ABI 7500，LightCycler480，CFX 96

等熒光 PCR 儀。

◆自備耗材和儀器

①滅菌 1.5mL 或 2.0mL 離心管；②滅菌 0.2mL PCR 管或八聯(lián)管；③冰盒；④移液器（1-10μL，10-100μL，100-1000μL）

及配套滅菌吸頭；⑤離心機；⑥渦旋混勻器；⑦金屬浴。

◆注意事項

1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區(qū)操作。

1）第一區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)。

2）第二區(qū)：樣本制備區(qū)。

3）第三區(qū)：擴增及產(chǎn)物檢測區(qū)。

★分區(qū)之間最好進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

2. 實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，使用移液器，試驗產(chǎn)生的所有廢棄物及時處理。

3．嚴(yán)格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴(yán)格按照說明書要求在冰上操作。

4．反應(yīng)液中的成分對光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心 30

秒，并按檢測頻次將反應(yīng)液以適當(dāng)體積分管保存。

5．反應(yīng)結(jié)束后，擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄，當(dāng)日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。

6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。

◆樣品處理

參照《SN/T 1151.2-2011 對蝦白斑病檢疫技術(shù)規(guī)范》或其他標(biāo)準(zhǔn)處理樣品，制備的樣本保存待用。詳細(xì)步驟請按照標(biāo)準(zhǔn)操作或查閱食安通軟件。

◆實驗操作

將試劑完全解凍，各組分離心 30s。

1.試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行）：

若有 N 個待檢樣品，則參照下表，按照 N+2 個數(shù)量計算各組分用量（N 個待檢樣品+1 個陰性對照+1 個陽性對照），將下表中試劑在 EP 管中渦旋混勻，離心 30 秒，分裝于 0.2mL PCR 管中，并向每管加入 1 滴 C-I（約 20μL）。

2．模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用配套水生動物病毒基因組 DNA 提取試劑盒系列產(chǎn)品。

3．添加模板（樣本制備區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行）

在步驟 1 中已含有反應(yīng)液的 PCR 管中加入 10μL 模板，順序為 NG-I、待測樣品模板、PG-WSSV-I。渦旋混勻30s，離心 1min，立即進(jìn)行擴增反應(yīng)。

4.  擴增反應(yīng)63℃條件下反應(yīng) 60 min。若使用熒光定量 PCR 儀，則熒光基團選擇 FAM，淬滅基團選擇 None，將 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作為一個循環(huán)，于 63℃ 45 s 處收集熒光信號，60 個循環(huán)。

其他儀器請參照儀器說明書進(jìn)行設(shè)置。

◆結(jié)果判定

儀器自動判定結(jié)果，若顯示“陽性”，則樣品中含有對蝦白斑綜合癥病毒（WSSV）；若顯示“陰性”，則樣品中不含有對蝦白斑綜合癥病毒（WSSV）或含量低于檢測限。

NG 反應(yīng)管結(jié)果顯示“陰性”，PG 反應(yīng)管結(jié)果顯示“陽性”，此次檢測結(jié)果有效，否則無效。如重復(fù)檢測結(jié)果仍為無效，請與技術(shù)支持人員聯(lián)系。