豬源性成分核酸檢測試劑盒（恒溫熒光法）使用說明

豬源性成分核酸檢測試劑盒（恒溫熒光法）

請于-20℃條件下保存，有效期 12 個月

◆ 產(chǎn)品說明

 物種鑒定系列基于獨特的恒溫熒光檢測技術(shù)，可針對食品、飼料等樣品中動物源性成分的特異核酸片段進行擴增，儀器實時監(jiān)測擴增過程中的熒光信號變化，自動判讀結(jié)果。本產(chǎn)品用于豬源性成分的檢測，檢出限

為 0.5%。

◆ 產(chǎn)品組成（48 測試）

 

	021011M
試劑	含量
A-Sus-I	1200μL Χ1 支
B-I	55μL Χ1 支
C-I	1200μL Χ1 支
NG-I	50μL Χ1 支
PG-Sus-I	50μL Χ1 支

 

◆ 適用儀器

 

ZYD-S1、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308c 等恒溫熒光檢測儀， ABI 7500，LightCycler480，CFX 96

 

等熒光 PCR 儀。

 

◆ 自備耗材和儀器

 

①滅菌 1.5mL 或 2.0mL 離心管；②滅菌 0.2mL PCR 管或八聯(lián)管；③冰盒；④移液器（1-10μL，10-100μL，100-1000μL）

 

及配套滅菌吸頭；⑤離心機；⑥渦旋混勻器；⑦金屬浴。

 

◆ 注意事項

 

1．本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染，實驗要分區(qū)操作。

 

1）第一區(qū)：試劑準備區(qū)。

 

2）第二區(qū)：樣本制備區(qū)。

 

3）第三區(qū)：擴增及產(chǎn)物分析區(qū)。

 

★ 分區(qū)之間最好進行物理性隔離，避免人為因素造成的污染。

 

2. 實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套，使用移液器，試驗產(chǎn)生的所有廢棄物及時處理。

 

3．嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰上操作。

 

4．反應(yīng)液中的成分對光敏感，應(yīng)避光保存。試劑使用前要完全解凍，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，推薦使用前離心 30

 

秒，并按檢測頻次將反應(yīng)液以適當體積分管保存。

 

5．反應(yīng)結(jié)束后，擴增管請置于密封袋內(nèi)丟棄，當日清理，開蓋易造成氣溶膠污染，禁止開蓋。

 

6．不同批號試劑請勿混合使用，在有效期內(nèi)使用。

 

◆ 樣品處理

 

參照《SN/T 3730.-2013 食品及飼料中常見畜類品種的鑒定方法 第 8 部分：豬成分檢測 實時 熒光 PCR 法》或其他標準處理樣品，制備的樣本保存待用。

 

①樣品的采集和制備是動物源性鑒別的重要步驟，為防止交叉污染，應(yīng)使用一次性消耗品，研缽應(yīng)經(jīng) 160℃干烤 2 h，其他不宜干烤或高壓處理的器皿應(yīng)使用 1%次氯酸鈉溶液浸泡。②取樣應(yīng)盡量采取肌肉組織，對于同一批樣品，應(yīng)多點采集合并后，作為一份樣品進行均質(zhì)，提取 DNA。③采樣過程應(yīng)快速完成，將采取的樣品迅速放入組織攪碎機中進行均質(zhì)成糜狀，充分混勻，取 0.1 g 充分混勻的樣品，采用液氮研磨或均質(zhì)器均質(zhì)。

 

詳細步驟請按照標準操作或查閱食安通軟件。

◆ 實驗操作

 

將試劑完全解凍，各組分離心 30s。

 

1. 試劑配制（試劑準備區(qū)，放置于冰盒中進行）：

 

若有 N 個待檢樣品，則參照下表，按照 N+2 個數(shù)量計算各組分用量（N 個待檢樣品+1 個陰性對照+1 個陽性對照），將反應(yīng)液置于 1.5mL 或者 2.0mL 離心管中，漩渦混勻，離心 30 秒，分裝于 0.2mL PCR 管中，并向每管加入 1

   滴 C-I（約 20μL）。

 

 

 

 

 

 

2．模板制備（樣本制備區(qū)）

 

試劑 使用量

 

A-Sus-I 22Χ(N+2)μL

 

B-I 1Χ(N+2)μL

 

 反應(yīng)液總體積   23Χ(N+2)μL