細(xì)胞分化軟骨細(xì)胞阿爾新藍(lán)（alcian blue）染色試劑盒使用說(shuō)明

細(xì)胞分化軟骨細(xì)胞阿爾新藍(lán)（alcian blue）染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

YIJI細(xì)胞分化軟骨細(xì)胞阿爾新藍(lán)（alcian blue）染色試劑是一種旨在使用陽(yáng)離子染料阿爾新藍(lán)，使軟骨組織上蛋白多糖聚糖染色，呈現(xiàn)深藍(lán)色，來(lái)分析固定處理的細(xì)胞樣本中軟骨生成狀況的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良傳統(tǒng)方法、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于動(dòng)物細(xì)胞分化和軟骨生成的檢測(cè)。廣泛用于軟骨細(xì)胞或組織病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術(shù)背景

間質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cell）分化產(chǎn)生脂肪細(xì)胞（adipocyte）、成骨細(xì)胞（osteoblast）、肌細(xì)胞（myocyte和軟骨細(xì)胞（chondrocyte）。軟骨細(xì)胞及其細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix）構(gòu)成軟骨組織（cartilage tissue），其含有硫酸軟骨素（chondroitin sulfate）和硫酸角質(zhì)素（karatan sulfate）等為主要成分的蛋白多糖（proteoglycan）聚糖（aggrecan），成為軟骨生成（chondrogenesis）的標(biāo)記（indicator）。阿爾新藍(lán)（alcian blue）是一種陽(yáng)離子含銅染料，使酸性粘多糖（mucopolysaccharide）類蛋白聚糖染色，呈現(xiàn)深藍(lán)色。 

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI清理液（Reagent A）  毫升

YIJI固著液（Reagent B）  毫升

YIJI染色液（Reagent C）  毫升

YIJI去色液（Reagent D）  毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)  1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent C），避免光照；YIJI去色液（Reagent D）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

核固紅復(fù)染試劑盒（YIJI40011）：用于常規(guī)染色后復(fù)染

小型染色缸：用于細(xì)胞染色操作

光學(xué)顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀察分析

實(shí)驗(yàn)步驟

操作一：細(xì)胞載玻片染色

• 樣本固著處理
• 取出待測(cè)的細(xì)胞載玻片 
• 小心加上x(chóng)x微升YIJI清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上x(chóng)x微升YIJI固著液（Reagent B），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 室溫下，孵育60分鐘
• 小心移去載玻片上的YIJI固著液（Reagent B）
• 小心加上x(chóng)x微升YIJI清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至8一次

二、樣本染色處理

• 小心加上x(chóng)x微升YIJI染色液（Reagent C），鋪滿整個(gè)載玻片樣品表面
• 室溫下，孵育60分鐘，避免光照
• 小心移去載玻片上的YIJI染色液（Reagent C）
• 室溫下，小心將載玻片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）

三、 （選擇步驟）樣本復(fù)染處理

• 小心加上x(chóng)x微升YIJI去色液（Reagent D）在載玻片上，鋪滿整個(gè)載玻片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘（注意：觀察背景藍(lán)色變化，避免過(guò)度褪色）
• 小心移去載玻片上的YIJI去色液（Reagent D）
• 室溫下，小心將載玻片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 樣本復(fù)染處理（核固紅）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)深藍(lán)色，背景呈現(xiàn)淺藍(lán)色調(diào)（如果復(fù)染：細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)粉紅色，細(xì)胞核呈現(xiàn)紅色）

操作二：24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

一、樣本固著處理

1．小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液

2．每孔加入xx微升YIJI清理液（Reagent A），清洗生長(zhǎng)中的細(xì)胞表面

3．小心抽去每孔里的YIJI清理液（Reagent A）

4．每孔加入xx微升YIJI固定液（Reagent B），覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面

5．在室溫下孵育60分鐘

6．小心抽去YIJI固定液（Reagent B）

7．每孔加入xx微升YIJI清理液（Reagent A），清洗細(xì)胞表面

8．小心抽去YIJI清理液（Reagent A）

9．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至8兩次

二、樣本染色處理

• 小心加上x(chóng)x微升YIJI染色液（Reagent C），覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
• 室溫下，孵育60分鐘，避免光照
• 小心抽去YIJI染色液（Reagent C）
• 小心加入xx微升YIJI清理液（Reagent A）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去YIJI清理液（Reagent A）

三、 （選擇步驟）樣本復(fù)染處理

• 小心加上x(chóng)x微升YIJI去色液（Reagent D），覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
• 室溫下孵育3分鐘（注意：觀察背景藍(lán)色變化，避免過(guò)度褪色）
• 小心抽去YIJI去色液（Reagent D）
• 小心加入xx微升YIJI清理液（Reagent A）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去YIJI清理液（Reagent A）
• 樣本復(fù)染處理（核固紅）
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：性細(xì)胞呈現(xiàn)深藍(lán)色，背景呈現(xiàn)淺藍(lán)色調(diào)（如果復(fù)染：細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)粉紅色，細(xì)胞核呈現(xiàn)紅色）

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須帶手套
• YIJI去色液（Reagent D）具有腐蝕性，注意操作安全
• 所有操作在室溫下進(jìn)行
• 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面
• 樣品去色避免過(guò)度
• 建議使用YIJI核固紅復(fù)染試劑盒（YIJI40011），增強(qiáng)染色對(duì)比度
• 細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列軟骨組織細(xì)胞染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰